Relação entre a aquisição da resistência a múltiplas drogas e marcadores de células-tronco em linhagens eritroleucêmicas humanas

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Lettnin, Aline Portantiolo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Biologia; Fisiologia; Transportadores ABC; Fenótipo MDR; Células-tronco; Linhagem celular; Linhagem celular K562; Linhagem celular K562-Lucena; Linhagem celular FEPS; Proteína OCT-4; Gene ALOX5; Leucemia mielóide; Biology; Physiology; ABC transporters; MDR Phenotype; Stem cells; Cell line; Cell line K562; Myeloid leukemia
• Link de acesso: http://repositorio.furg.br/handle/1/8170

A resistência a múltiplas drogas (MDR) pode ser caracterizada pela capacidade de exportar diferentes compostos químicos para o meio extracelular, sendo a principal causa na falta de sucesso na terapia do câncer. Atualmente uma possível relação do fenótipo MDR e a presença de células-tronco cancerígenas (CTCs) nesta patologia tem sido estudada. O objetivo desta tese foi investigar a relação entre a presença de células-tronco (CT), diferenciação celular e o fenótipo MDR nas linhagens celulares eritroleucêmicas humanas K562, K562-Lucena e FEPS. O silenciamento do pseudogene OCT4-PG1 na FEPS com o plasmídeo shRNA, a sensibilidade da linhagem FEPS silenciada aos quimioterápicos vincristina (VCR) e daunorrubicina (DNR) por exclusão por azul de tripan, transformação das células K562 com concentrações crescentes de VCR e DNR, análise de expressão das proteínas ABCB1 e OCT-4 por citometria de fluxo foi realizado. Ademais, foi analisada a interação do OCT4-PG1 com transportadores pela rede STRING, atividade das proteínas de efluxo ABCB1 e ABCC1, análises de expressão gênica de ABCB1, ABCC1, ALOX5, OCT-4 por PCR-tempo real nas células K562, K562-Lucena, FEPS, K562-Lucena e FEPS silenciadas para ABCB1. As células FEPS silenciadas para OCT4-PG1 apresentaram menores níveis de mRNA e proteína OCT-4, diminuição na expressão gênica, proteica e atividade da proteína ABCB1, aumento na expressão gênica de ALOX5 e ABCC1, bem como a atividade deste transportador, sensibilidade aos quimioterápicos e a rede STRING demonstrou interação direta de OCT4-PG1 com OCT-4, SOX2 e NANOG e interação indireta com os transportadores ABC. As células K562 apresentaram sensibilidade com 15, 30 e 60 nM de VCR a partir de 48h e a partir de 33,35 nM de DNR em 96h. As células K562 transformadas com os quimioterápicos VCR e DNR apresentaram aumento na expressão gênica e proteica ABCB1, diminuição na expressão gênica ALOX5 já nas concentrações intermediárias. As células K562-Lucena silenciadas para ABCB1 aumentaram a expressão gênica ABCC1 enquanto este gene diminuiu na FEPS silenciadas para ABCB1. Ambas linhagens K562-Lucena e FEPS silenciadas para ABCB1 aumentaram a expressão gênica de ALOX5. Os dados mostram que mudanças nos perfis de marcadores de células-tronco OCT-4 e ALOX5, modificaram a manutenção e aquisição do fenótipo MDR nas linhagens celulares K562-Lucena e FEPS.