Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2020 |
| Autor(a) principal: |
Oliveira, Luã Cardoso de |
| Orientador(a): |
Oliveira, Rosely Maria Zancopé,
Alves, Carlos Roberto |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Link de acesso: |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60677
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Resumo: |
No Rio de Janeiro observa-se uma hiperendemia de esporotricose, causada principalmente por Sporothrix brasiliensis. Espécies clínicas de S. brasiliensis, produzem urease, porém pouco se avançou no conhecimento desta. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a urease, verificar a expressão de seu gene e começar a entender seu possível papel na virulência. Foram utilizadas 2 cepas de S. brasiliensis, uma delas considerada produtora de urease e outra considerada não produtora de urease. Fenotipicamente, foi observado que apenas a cepa considerada urease positiva foi capaz de crescer em meio de cultivo cujo a ureia era a única fonte de nitrogênio, e quando esta foi cultivada em meio com inibidor tioureia apresentou pouco crescimento. Após, o extrato proteico foi submetido a ressonância plasmômica de superfície (SPR) e western blot para caracterizar a enzima bioquimicamente. A expressão gênica da urease foi verificada por qPCR e a comparação, in silico, entre a urease de S. brasiliensis, a de outros 20 fungos e de Canavalia ensiformis. A técnica de western blot não demonstrou reatividade na cepa negativa, já na SPR esta foi evidenciada nas duas cepas. A partir disto, foram realizadas reações de qPCR para verificar a expressão gênica do gene codificador da urease nas duas cepas, e em ambas o RNA mensageiro para urease está presente. Foi comparada, através de ferramentas de bioinformática, as sequencias de urease de 21 fungos e de C. ensiformis, e a urease se mostrou uma enzima bem conservada entre as espécies analisadas, e parece ser, corroborando com os achados in vitro uma enzima que se localiza no citoplasma celular. Os achados nesta tese, indicam que a urease provavelmente é um gene constitutivo neste modelo fúngico, e muito importante para o crescimento celular do S. brasiliensis, pois em condições inibitórias da enzima o fungo foi incapaz de crescer normalmente. Esses dados, juntamente com a demonstração da alta preservação desta enzima nos fungos, sugerem que a urease é importante para a fisiologia do S. brasiliensis em parasitismo |
