Avaliação do ensaio imunoenzimático empregando frações solúvel e enriquecida com membrana de cepa infectiva de Leishmania (Viannia) braziliensis para o diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2009
Autor(a) principal: Silva, Jamyra Iglesias
Orientador(a): Passos, Sônia Regina Lambert, Mello, Fernanda Carvalho de Queiroz
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/28516
Resumo: Introdução: O diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é baseado na visualização ou no isolamento em cultura, ambos são procedimentos demorados e com baixa sensibilidade. Alternativamente, devido à praticidade de execução o Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) pode ser utilizado para detecção de imunoglobulina G (IgG) anti-Leishmania. Objetivo: Avaliar a acurácia e a confiabilidade do ensaio imunoenzimático (ELISA) com frações solúvel (FS) e enriquecida com membrana (FM) de cepa em fase infectiva e não infectiva de Leishmania (Viannia) braziliensis para o diagnóstico da LTA. Método: Estudo de validação de 152 amostras de soro, 76 de pacientes com LTA (diagnosticados por imprint, histopatologia ou cultura) e 76 controles com outros diagnósticos, selecionados randomicamente de uma coorte de 400 indivíduos investigados em um centro de referência no Rio de Janeiro, Brasil, entre 2005 e 2007. Para avaliar a confiabilidade (CCI), amostras randomicamente selecionadas foram testadas duas vezes e de forma mascarada para cada fração antigênica. Foram empregados antígenos obtidos de formas promastigotas infectivas de Leishmania (Viannia) braziliensis (MHOM/BR/02/R.787) em fase estacionária de crescimento. Foram estabelecidos cut-offs para cada antígeno empregado utilizando-se gráficos de Receiver Operating Characteristic Curve (Curva ROC) e a performance dos testes foi comparada através de áreas sob a curva (AUC), sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo e negativo (VPP e VPN) e razões de verossimilhança (RV), utilizando-se o teste qui-quadrado e considerando-se valores de p < 0,05 como significativos A confiabilidade foi analisada utilizando-se o coeficiente de correlação intraclasse (CCI). A amostra foi testada quanto a infectividade através da infecção em cultura de macrófagos (55a. passagem em cultura), lise pelo sistema complemento (7a., 61a. e 68a. passagens em cultura) e produção de óxido nítrico por Leishmania (5a., 32a. e 66a. passagens em cultura). Resultados: Os Cut-offs foram 0,22 (FS) e 0,33 (FM). Ambas as frações discriminaram bem os doentes com AUCs elevadas (p < 0,0001) e não houve diferença entre as frações (p = 0,45). A sensibilidade foi 89,5% para ambas as frações e a especificidade foi 89,5 (FS) e 93,4 (FM); RV+ foi 8,5 (FS) e 13,6 (FM) e os CCIs foram excelentes (FS: 0,96 e FM: 0,90) A amostra permaneceu infectiva até a 68a. passagem, apresentando 7,5% de formas metacíclicas infectantes. A diminuição na produção de óxido nítrico indica que a cepa estava perdendo infectividade. Conclusão: Ambos os antígenos da cepa infectiva ofereceram excelente precisão e acurácia diagnostica para LTA, sugerindo que a escolha possa recair sobre a FS por aspectos de custo e praticidade de execução. A cepa não perdeu a sua infectividade.