Production of T. gondii transgenic strains to characterize the tubulin cofactor B interactome

• Main Author: Veva, Ana Madalena Martins
• Publication Date: 2021
• Format: Master thesis
• Language: eng
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10400.21/14100
• topic: Toxoplasma gondii; Tubulin cofactor B; TBCB; BioID; Projeto UID/CVT/00276/2019

Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que infeta a maioria dos animais, apresentando uma distribuição mundial. Este apresenta duas fases no seu ciclo de vida: uma fase assexual (que ocorre no interior do hospedeiro intermediário) e uma fase sexual (que ocorre no interior do hospedeiro definitivo). O parasita apresenta uma morfologia eucariótica clássica, sendo uma célula altamente polarizada. De entre as suas estruturas, o complexo apical é uma estrutura essencial para a patogenicidade e sobrevivência do parasita, uma vez que apresenta várias estruturas (como o conoide e os microtúbulos sub-peliculares) que apresentam uma elevada importância ao nível da invasão da célula do hospedeiro. O cofator B da tubulina (TBCB) é uma proteína envolvida nas vias de folding e degradação da tubulina, com mecanismos mal caracterizados em T. gondii, e em que a sua expressão pode estar relacionada com as taxas de invasão e saída da célula. Por este motivo, o grande objetivo é caracterizar o interactoma do TBCB e para isto iremos utilizar o sistema de BioID, que permite usar biotinilação por proximidade das proteínas, para determinar os mecanismos de ação do TBCB. Para isso, pretendemos com este trabalho produzir estirpes transgénicas de T. gondii que expressem BirA em fusão com TBCB (BirA_TBCB) e apenas BirA.