Efeitos da inibição da proteína PTEN sobre a neuroinflamação em células gliais.

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Paixão, Amanda Galvão da
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Células gliais; Compartimentalização; Compartimentalization; Glial cells; Neuroinflamação; Neuroinflammation; PTEN
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-08102019-160812/

Outrora proposta exclusivamente como fosfatase citoplasmática, hoje sabe-se que as funções da PTEN vão além de sua atividade de fosfatase e podem depender de sua localização na célula. Evidências crescentes apontam para o potencial papel da PTEN sobre a inflamação. Este trabalho objetivou investigar os efeitos modulatórios da PTEN sobre a neuroinflamação e o papel de sua compartimentalização (núcleo/citoplasma) em células gliais. Células gliais primárias de rato foram co-tratadas com BpV(pic) e LPS por períodos de 4h e 24h. Células U87MG (PTENnull) foram desafiadas com LPS e transfectadas com os plasmídeos para localização subcelular da PTEN. Os efeitos foram avaliados por ensaios de viabilidade celular, Western Blotting, imunofluorescência, qRT-PCR, ELISA e Multiplex. A eficiência de inibição da PTEN pelo BpV(pic) foi confirmada pela maior fosforilação da AKT. Em 24h de co-tratamento com BpV(pic), houve redução da resposta ao LPS para as citocinas IL-1<font face = \"symbol\">b e TNF-<font face = \"symbol\">a tanto a nível de RNAm quanto proteico, bem como indução da enzima Arginase-1 e atenuação da expressão do receptor CD206. Ainda em 24h, houve indução da expressão das enzimas antioxidantes Sod2 e Gsr nas células co-tratadas com BpV(pic) e LPS. Em 4h de co- tratamento, a inibição da PTEN por si só induziu a secreção da citocina IL-6. Tanto o BpV(pic) exclusivamente quanto o co-tratamento com LPS não interferiu com a sinalização de IL-10 nem com os níveis de NO. Interessantemente, o desafio com LPS em células U87MG (PTENnull) não induziu resposta via translocação de p65 ou secreção de TNF-<font face = \"symbol\">a, mas reduziu a viabilidade celular em altas doses (100 <font face = \"symbol\">mg/mL). A transfecção das células com plasmídeos para localização subcelular da PTEN sugere que a linhagem U87MG parece não ser facilmente transfectável pelos métodos avaliados. A inibição farmacológica da PTEN mostrou-se um interessante alvo à reversão da resposta glial ao LPS. A continuidade deste estudo com outros esquemas de tratamento com BpV(pic) e utilizando-se um modelo de células PTENnull mais facilmente transfectável pode levar a uma melhor interpretação dos dados obtidos até o momento.