Avaliação funcional de embriões humanos doados para pesquisa: viabilidade, qualidade morfológica e potencial de geração de linhagem de células-tronco pluripotentes

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Ceschin, Ianaê Ichikawa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 1. Células-tronco embrionárias; 1. Embryonic stem cells; 2. Preimplantation genetic test; 2. Teste genético pré implantacional; 3. Aconselhamento genético; 3. Genetic counseling
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41136/tde-02092022-145215/

As células-tronco embrionárias humanas (hESC) são um recurso precioso para pesquisadores que estudam biologia celular do desenvolvimento e terapia celular. Eles podem ser obtidos de embriões doados por tempo excedido de armazenamento congelado estipulado pela legislação ou por possuir anormalidades genéticas detectadas em teste genético pré-implantacional (PGT). No entanto, existem poucos estudos relatando a viabilidade de derivar linhagens de hESC de embriões com baixa qualidade morfológica e com anormalidades genéticas detectadas no PGT. Este estudo foi prospectivo e realizado de fevereiro de 2020 a abril de 2021 com 23 blastocistos humanos doados para pesquisa. Os embriões foram avaliados morfologicamente antes do procedimento de biópsia do trofectoderma ou congelamento e 24 horas após o descongelamento. Os embriões foram descongelados e colocados em condições de cultura apropriadas para a geração de hESC. A linhagem hESC foi avaliada com potencial de pluripotência por imunofluorescência, citometria de fluxo e diferenciação espontânea in vitro. A presença de aneuploidia foi avaliada por multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) e microarray comparative genomic hybridization (array-CGH). Dezessete blastocistos sobreviveram ao procedimento de descongelamento, dezesseis deles apresentaram viabilidade. Em relação a qualidade morfológica embrionária, com 24 horas após o descongelamento, 75% deles apresentaram baixa qualidade. Apenas um embrião, com ótima qualidade morfológica, que não foi realizado o PGT, foi capaz de gerar uma nova linhagem de hESC. A caracterização adicional da linha hESC revelou células-tronco euploides totalmente funcionais com pluripotência preservada. Esta linhagem de células euploides pode ser um recurso útil para o desenvolvimento humano e pesquisa básica. Embriões com baixa qualidade morfológica e com anormalidades genéticas no PGT, apresentam potencial limitado de expansão in vitro e de geração de linhagem de células-tronco embrionárias.