Investigação dos efeitos da inibição farmacológica de HSP70 em células endoteliais humanas primárias de diferentes berços vasculares

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Melo, Everton Gonzaga de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Angiogênese; Angiogenesis; Células endoteliais; Endothelial cells; HSP70; Proteostase vascular; Shear stress; Vascular proteostasis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11042025-110155/

As proteínas de choque térmico de 70-kDa (HSP70) constituem uma família de chaperonas moleculares altamente conservadas e presentes em todos os organismos. A família da HSP70 assume papel central na regulação da proteostase, desde o auxílio ao enovelamento de cadeias polipeptídicas recém-sintetizadas, estabilização da estrutura nativa de proteínas até o endereçamento de proteínas mal enoveladas para a degradação. A HSC70 humana, codificada pelo gene HSPA8, possui expressão constitutiva, enquanto a HSP70 (HSPA1A) possui expressão aumentada em condições de estresse que levam a uma maior incidência de danos às proteínas e maior fragilidade na proteostase. Embora a HSP70 realize interação com receptor de fator de crescimento endotelial vascular 2 (VEGFR2), proteína contendo domínio de lectina tipo C 14a (CLEC14a), oxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e trombomodulina, o exato mecanismo não é claro e a função da HSP70 nas células endoteliais (ECs) de diferentes berços vasculares não é conhecida. Nós padronizamos a formação de tubo em célula endoteliais humanas primárias da veia umbilical (HUVEC), artéria coronária (HCAEC) e artéria pulmonar (HPAEC), e observamos que a inibição química da HSP70 com VER-155008, inibidor competitivo de ATP, bloqueia a angiogênese em todas as ECs testadas. No contexto de doença, mostramos que as ECs isoladas de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo crônico (CTEPH) apresentam formação de tubo prejudicada comparada a HPAEC indicando a função primordial da HSP70 no controle da disfunção endotelial. Com objetivo de estudar a nível molecular a função da HSP70 nas EC, realizamos a imunoprecipitação com anticorpos imobilizados em coluna (kit Pierce Direct IP), mas não foi possível imunoprecipitar a própria HSP70, indicando que esse kit não é apropriado nestes ensaios. Nos vasos, as ECs estão expostas a força hemodinâmica gerada pelo fluxo sanguíneo denominada de força de cisalhamento/shear stress. Em ensaios de mimetização de shear stress, HUVEC tratadas com VER-155008, não alinharam na direção do fluxo em comparação ao controle. Portanto, nós descobrimos que a HSP70 é um essencial mediador da mecanotransdução na célula endotelial. Os nossos dados corroboram dados da literatura da formação de tubo em HUVEC, mostram que é um fenômeno independente do berço vascular, sugerem função essencial da HSP70 na resposta a shear stress e ressaltam a implicação da HSP70 nas doenças cardiovasculares e pulmonares.