Função e perfil metabólico de plaquetas na infecção experimental por Achromobacter xylosoxidans

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Pastore, Marcella Roverato
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bacteria; Bactéria; Immune system; Metaboloma; Metabolome; Plaquetas; Platelets; Sistema imune
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-29092021-085420/

As plaquetas são elementos anucleados do sangue que têm papel considerável na modulação da hemostasia. Estudos recentes indicam que as plaquetas são reguladores essenciais do sistema imunológico e apresentam um papel fundamental nas infecções. As plaquetas armazenam grandes quantidades de moléculas que promovem a eliminação direta do patógeno ou modulam as atividades efetoras dos leucócitos. Achromobacter xylosoxidans são normalmente encontrados no meio ambiente e são patógenos oportunistas, infectando principalmente pessoas com fibrose cística (FC), tumores e imunodeficiências. O objetivo deste estudo foi investigar o papel das plaquetas na resposta imune contra A. xylosoxidans. Para tal, investigamos o perfil de ativação de plaquetas incubadas com A. xylosoxidans quantificando a expressão da P-selectina (CD62P) por meio de citometria de fluxo. Observamos que tanto a porcentagem de plaquetas que expressaram P-selectina quanto a média da intensidade de fluorescência de CD62P foram significativamente maiores após incubação com A. xylosoxidans, demonstrando que as plaquetas são ativadas por este bacilo. Também avaliamos a atividade microbicida das plaquetas após incubação das mesmas com A. xylosoxidans. Para tanto, plaquetas isoladas de sangue periférico de humanos voluntários sadios, foram incubadas por 10 minutos, 2, 4 e 8 horas com 106 bactérias, a 37OC, 5% de CO2. Após estes períodos, as suspensões de bactérias foram então semeadas em BHI-ágar para contagem de Unidades Formadoras de Colônias (CFU). Observamos que as plaquetas de todos os voluntários inibiram o crescimento bacteriano entre 10% a 85%, sendo a atividade microbicida maior após 4h e 8h de incubação. Nossos dados, demonstram que as plaquetas humanas apresentam diretamente atividade microbicida e/ou bacteriostático de A. xylosoxidans. Por fim, avaliamos as alterações metabólicas decorrentes da interação entre plaquetas e bactérias. Para tanto, utilizamos a espectrometria de massa de alta resolução acoplada à cromatografia líquida, tecnologia de ponta na área de metabolômica e biologia de sistemas. Os dados foram analisados por meio de programas de biologia computacional projetados especificamente para análises estatísticas e funcionais. Nossos resultados demonstraram que A. xylosoxidans contribui para o distúrbio de diferentes vias metabólicas em plaquetas humanas, como metabolismo de ácidos graxos, pirimidina e xenobióticos. Esses resultados demonstram que A. xylosoxidans ativa plaquetas, que também apresentam atividade antimicrobiana significativa quando expostas a essa bactéria. Além disso, A. xylosoxidans causa alterações no perfil metabólico das plaquetas.