Identificação de novas proteínas envolvidas na ativação do inflamassoma de NLRC4

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Becerra, Amanda de Matos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Inflamassoma; Inflammasome; Legionella pneumophila; Pak; Pak2
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-03012023-113847/

O inflamassoma é uma plataforma multiproteica formada a partir do reconhecimento de diferentes sinais, como o estresse ou dano celular e moléculas microbianas. Dentre os diferentes inflamassomas, NAIP/NLRC4 é um dos mais estudados e está envolvido no reconhecimento de moléculas microbianas no citosol, promovendo resistência do hospedeiro à infecção. Como objetivo principal do trabalho, propusemos identificar novas proteínas envolvidas na ativação do inflamassoma de NLRC4. Para isso, utilizamos a técnica de CRISPR-cas9 para deleção, em macrófagos, de genes previamente identificados em nosso laboratório, para avaliar seus possíveis papéis na ativação do inflamassoma. Dentre os genes, avaliados encontramos uma serina-treonina quinase que demonstrou ter um papel importante na via de ativação de NLRC4. Realizamos ensaios de replicação utilizando Legionella pneumophila como modelo, e descobrimos que a serina-treonina quinase tem papel importante no controle da infecção mediada por NAIP/NLRC4 tanto in vivo, quanto in vitro. Além disto, para investigar se este gene também estaria envolvido na ativação e morte celular por diferentes inflamassomas, macrófagos deficientes para a serinatreonina quinase foram gerados, e estimulados com nigericina, para avaliação do inflamassoma de NLRP3; poly (dA:dT) para avaliação de AIM2; Legionella pneumophila de tipo selvagem para avaliar NAIP/NLRC4; e L. pneumophila deficiente em flagelina para avaliar a ativação mediada via caspase-11. Nossos resultados demonstram que a serina-treonina quinase está envolvida na ativação de todos os inflamassomas, conforme observado pela redução da produção de IL-1β, caspase-1 e morte celular, além de uma redução na formação de punctas de ASC, indicando que essa proteína é importante para a oligomerização de ASC. Além disto, foi observado que a serina-treonina quinase colocaliza com os punctas de ASC, sugerindo uma interação física entre ela com o inflamassoma.