Expressão, purificação,caracterização e modelagem molecular da enzima phosphoglucose isomerase de Trypanosoma Brucei

• Ano de defesa: 2001
• Autor(a) principal: Eugenio, Luiz Marcelo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Molecular modellig; PGI; Phosphoglucose isomerase; Trypanosoma; Trypanosoma brucei
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-06052008-092309/

A tripanossomose africana, ou doença do sono, como é popularmente conhecida, atingiu 25 mil pessoas só em 1995. Estima-se que a doença seja responsável pela morte de 10.000 pessoas a cada ano, segundo os dados da Organização Mundial da Saúde. Sua distribuição é exclusivamente africana, devido ao fato de sua transmissão depender da Tsé-Tsé, mosca do gênero Glossina que encontra lá condições favoráveis para sua proliferação. Atualmente os medicamentos existentes não são eficientes e devem ser ministrados em doses altas, provocando graves efeitos colaterais. O parasita Tripanosoma brucei, na forma encontrada no sangue dos mamíferos (tripomastigota), é o responsável pela doença e, assim como toda a família Trypanosomatidea, é altamente dependente de glicose. Esses parasitas consomem a quantidade de glicose equivalente à sua massa em aproximadamente sete horas. A via glicolítica torna-se, portanto, chave para o desenvolvimento de inibidores que possam ser utilizados no combate a estes parasitas. Nesse sentido, temos realizado estudos com a enzima glicose-6-fosfato isomerase (glucose-6-fosfato isomerase; Phosphoglucose Isomerase PGI; EC 5.3.1.9), responsável pela isomerização reversível da D-glicose-6-fosfato e D-frutose-6-fosfato e participa na glicólise como a segunda enzima da via. Os trabalhos realizados até aqui culminaram na sua expressão em forma recombinante, purificação através de coluna de afinidade, e caracterizações enzimáticas. Sua atividade específica foi determinada através de métodos já estabelecidos encontrados na literatura. O IC50 da enzima frente a quatro inibidores da reação foi determinado. O trabalho finaliza com a construção de um modelo estrutural da enzima determinado através de métodos de modelagem molecular por homologia.