Análise do metabolismo e estabilidade de inibidores de cisteíno protease em amostras biológicas por meio de HPLC-UV-MS

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Batista, Pedro Henrique Jatai
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: análise da farmacocinética; chemical stability; estabilidade química; metabolism; metabolismo; permeabilidade; permeability; pharmacokinetic analysis; relação estrutura-propriedade (SPR); structure-property relationship (SPR)
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-04052021-145432/

O estudo de substâncias bioativas é multifacetado e requer que diversos métodos sejam aplicados para identificar um candidato a fármaco. Para doenças negligenciadas como a de Chagas, alvos macromoleculares como a cruzaína são usados para a descoberta de inibidores. Dentre eles, dipeptidil nitrilas inibem a cruzaína e apresentam grande potencial terapêutico. No entanto, os parâmetros farmacocinéticos são de grande relevância e devem ser obtidos para estabelecer relações estrutura-propriedade (SPR) para a permeabilidade, o metabolismo e a estabilidade química. Neste trabalho, a validação do método analítico HPLC-UV de um inibidor sintetizado pelo grupo (Neq0570) é realizada usando o odanacatib como padrão interno, usando a legislação atual da ANVISA. O desenvolvimento do método analítico levou a um gradiente de 15 a 85% de acetonitrila em 14 min, vazão 1,0 mL.min-1, 35 oC, volume de injeção de 5 µL, detecção em 225 nm (Neq0570) e 265 nm (odanacatib). A técnica de preparo de amostras foi a extração líquido-líquido em 3 extrações sequenciais, utilizando o éter metil terc-butílico como solvente extrator na proporção de 1:1. O método apresentou boa linearidade na faixa de 10-70 ng.mL-1, não apresentou efeito de matriz e nem efeito residual, apresentou também seletividade e acurácia. O método foi capaz de quantificar o composto parental para as duas cepas diferentes, Y e Tulahuen, nos meios extracelular (23% e 22%, respectivamente) e intracelular (43% e 46%, respectivamente). Desta forma, entre 66 a 69% do composto parental estava presente no frasco de cultura após 3 dias de ensaio, o que demonstra uma boa estabilidade da substância. Os possíveis metabólitos foram propostos a partir da estrutura química do composto parental. Ao final, avaliou-se a reatividade intrínseca desta substância, e de outros derivados sintetizados pelo grupo, sendo que todos apresentaram boa estabilidade. Os resultados alcançados demonstram que Neq0570 é um composto matriz (lead) adequado para a continuação dos estudos de otimização química de derivados antichagásicos, considerando a gênese planejada de fármacos.