Efeitos do extrato aquoso de guaraná (Paullinia cupana) em pó nos mecanismos envolvidos com a absorção de colesterol in vitro e em células Caco-2

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Figueira, Marcela de Souza
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bioacessibilidade; Bioacessibility; Cholesterol; Colesterol; Guarana; Guaraná; Polifenóis; Polyphenols
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6138/tde-07012022-085810/

Introdução - O risco de doenças cardiovasculares, dentre elas a aterosclerose, está associado com a hipercolesterolemia, resultado de fatores de risco comportamentais, metabólicos e genéticos. Intervenções dietéticas como o uso do guaraná (Paullinia cupana), podem ser úteis, uma vez que é um alimento rico em compostos bioativos como as catequinas, que possuem elevada atividade antioxidante, inibem a oxidação da lipoproteína de densidade baixa (LDL) e a peroxidação lipídica, sendo capazes de reduzir a concentração plasmática de colesterol, por mecanismos ainda não totalmente elucidados. Objetivo - Investigar os efeitos do extrato aquoso de guaraná (Paullinia cupana) em pó sobre mecanismos envolvidos com a absorção de colesterol em modelos in vitro e em células Caco-2. Métodos - O extrato aquoso do guaraná em pó foi submetido à digestão in vitro, os fenólicos totais foram quantificados pelo método de Folin-Ciocalteu e a determinação do perfil de fenólicos foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), com detector UV/VIS a 210 nm. A atividade antioxidante foi determinada pela capacidade de absorbância de radical oxigênio (Oxygen Radical Absorbance Capacity - ORAC) e foram avaliadas a capacidade de inibição da lipase pancreática, de ligação com ácidos biliares, de interação com a fosfatidilcolina micelar e de inibição da solubilização micelar do colesterol de forma in vitro. Foi realizado ensaio de permeação do colesterol por um período de 2 h em células Caco-2 semeadas e diferenciadas em placas transwell de 24 poços com uma solução de micelas de colesterol e extrato de guaraná em diferentes concentrações. O teor de colesterol permeado foi determinado por HPLC/UV a 206 nm. Foi realizado o ensaio de Western blotting para determinar o conteúdo proteico dos transportadores de colesterol (NPC1L1, ABCG5, ABCG8) e LXR-alfa em células intestinais Caco-2 após a incubação com diferentes concentrações do extrato em 2 e 16 horas. Resultados: O conteúdo total de fenólicos do extrato de guaraná foi 104,36 (± 3,62) mg EAG/g de guaraná em pó. Após o processo de digestão, este valor foi de 48,62 (± 3,97) mg EAG/g de guaraná em pó, demonstrando a bioacessibilidade dos polifenóis. Foram identificados os compostos procianidina B1 (1,56 ± 0,04 mg/g) e B2 (2,34 ± 0,06 mg/g), catequina (24,26 ± 0,63 mg/g), epicatequina (20,39 ± 1,20 mg/g) e cafeína (34,93 ± 0,75 mg/g) no extrato não digerido. Após digestão in vitro, somente a catequina, epicatequina e cafeína foram bioacessíveis com 181,16 %, 136,78 % e 213,51 % de bioacessibilidade, respectivamente. A atividade antioxidante do extrato aquoso não digerido foi menor que do digerido, sendo os valores finais de ORAC de 2512 (± 399) e 4321 (± 778) μmol Eq Trolox/g de guaraná em pó, respectivamente. O extrato exibiu uma atividade inibitória da enzima lipase pancreática de forma dose-dependente, com IC50 de 1033 μg/mL. O extrato também demonstrou uma capacidade de ligação ao taurocolato de sódio de 45,63 (± 8,50) % e de 44,30 (± 8,88) % com concentrações de 1,0 mg/mL e 0,5 mg/mL, respectivamente, correspondendo a 71,78 (± 13,36) % e 93,11 (± 18,65) % da capacidade de ligação da colestiramina quando utilizada nas mesmas concentrações. Observou-se uma redução de 20,47 (± 10,24) % e 17,06 (± 12,88) % na concentração da fosfatidilcolina micelar quando o guaraná foi utilizado nas concentrações de 1,0 e 0,50 mg/mL, respectivamente, em comparação com a micela padrão sem amostra e uma inibição da solubilização micelar do colesterol de 10,14 % pelo guaraná a 1,0 mg/mL. Após o experimento de permeação, as concentrações de colesterol no compartimento basolateral foram de 197,89 (± 3,95), 151,76 (± 1,39) e 94,51 (± 9,49) μg/mL, quando 0,025, 0,050 ou 0,075 mg/mL de guaraná foram utilizados, respectivamente, demonstrando redução de 23,31 % e 52,24 % à medida que a concentração de guaraná utilizada aumentou. Observou-se uma redução do conteúdo proteico do NPC1L1 após 16 horas de incubação com guaraná nas concentrações de 0,050 e 0,075 mg/mL. Em relação ao ABCG5, observou-se um aumento do conteúdo nas concentrações de 0,025 e 0,075 mg/mL de guaraná após 02 horas. Não foram observadas diferenças importantes nos conteúdos de ABCG8 e do LXR-alfa. Conclusões: O extrato aquoso de guaraná em pó demonstrou uma redução da absorção de colesterol em células Caco-2. O extrato também demonstrou uma atividade inibitória da lipase pancreática dose-dependente, uma boa capacidade de ligação aos ácidos biliares e de interação com a fosfatidilcolina micelar, além de uma capacidade de inibição da solubilização micelar do colesterol de forma in vitro. O extrato também foi capaz de modular negativamente o conteúdo proteico do NPC1L1 e positivamente o conteúdo do ABCG5. A sua ingestão pode ser considerada uma importante fonte alimentar com potencial efeito hipocolesterolêmico, capaz de reduzir a absorção de lipídios no intestino, podendo ser utilizado como adjuvante na regulação da hipercolesterolemia, provavelmente devido à presença de polifenóis.