Avaliação da capacidade de formação de biofilmes e de invasão de células intestinais em cultura tridimensional por Listeria monocytogenes em presença de Lactobacillus sakei 1 e inulina

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Costa, Hevelin Regiane Augusto da Silva
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biorreator STLV; Cultura tridimensional; Prebiotic; Prebiótico; Probiotic; Probiótico; STLV bioreactor; Three-dimensional culture; Virulence; Virulência
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-30032022-111554/

Listeria monocytogenes é uma bactéria transmitida principalmente via alimentos, o controle de L. monocytogenes é difícil, pois esta bactéria apresenta vários fatores de virulência, como formação de biofilmes, adesão e invasão celular. Um avanço em estudos para a verificação dos fatores de virulencia em bactérias patogênicas é através do cultivo de células tridimensional (3D) por biorreator - the \"Slow Turning Lateral Device\" (STLV). O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antilisteriano de combinações de L. sakei 1, uma bactéria lática (BAL) e de seu sobrenadante livre de células (SLC), bem como do prebiótico inulina, a fim de antagonizar a adesão e invasão de L. monocytogenes em células de adenocarcinoma de cólon humano (Caco-2) obtidas através de biorreator STLV, bem como inibir a formação de biofilmes em superfície abiótica. O ensaio de biofilme foi realizado em microplacas através da coloração com cristal violeta 0,1% (p/v), as células Caco-2 obtidas através do biorreator STLV, foram utilizadas nos ensaios deadesão e invasão, e para avaliar os possíveis danos celulares do SLC, BAL e prebiótico através dos ensaios de avaliação da atividade metabólica com Brometo Tiazolil Azul de Tetrazólio (MTT) e do ensaio de citotoxicidade através de 0,4% de azul de tripano. Os resultados demonstraram que a formação de biofilme por L. monocytogenes foi inibida pelo uso de SLC contendo bacteriocina, e inulina, e a condição que apresentou a menor formação de biofilme foi apresentada com a combinação sinérgica destes compostos apresentando uma absorbância de 0,124 ± 0,023. A adesão/invasão de L.monocytogenes foi significativamente menor na presença da bacteriocina pelo uso do SLC de L. sakei 1 , e em co-cultura com L. sakei 1, sendo que houve maior antagonismo quando estes compostos foram adicionados em combinação com inulina (p<0,05), sendo que a adesão de L.monocytogenes apresentou uma porcentagem de 41,56%±8,4 e ao utilizar a combinação de co-cultura com a inulina a adesão de L. monocytogenes às células foi de 17,46% ± 1,31 e no ensaio de invasão nestas mesmas condições 47,55% ± 6,06 e 20,21% ± 3,41 respectivamente. Também ao ser analisado os danos celulares destes compostos, todas as condições apresentaram um número de células viáveis e metabolicamente ativas superiores a 45%, sendo que quando adicionado o SLC de L. sakei 1 com prebiótico inulina os danos celulares apresentados eram menores e sempre superiores a 61%. Neste trabalho ficou evidenciado como o uso da inulina e do SLC de L. sakei 1, e da BAL L. sakei 1 apresenta capacidade de modular a formaçãode biofilmes, adesão, invasão celular da bactéria L. monocytogenes, e como estes compostos apresentam potencial simbiótico por apresentar mecanismos sinérgicos.