Caracterização da atividade proteinásica digestiva de Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae) e sua sensibilidade à chagasina

• Ano de defesa: 2002
• Autor(a) principal: Lopes, Francisco Cláudio da Conceição
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: ATIVIDADE ENZIMÁTICA; ENZIMAS PROTEOLÍTICAS; GORGULHO-DA-CANA-DE-AÇÚCAR; INIBIDORES DE PROTEINASES; PLANTAS TRANSGÊNICAS
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-20191218-180659/

Inibidores de proteinase têm sido amplamente utilizados na transformação de plantas visando o controle de insetos-praga. Neste trabalho nós realizamos um detalhado estudo de identificação das atividades proteolíticas presentes no intestino de larvas de Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae), uma importante praga da cana-de-açúcar. Foi verificado uma atividade majoritária de cisteíno proteinases (CP's), juntamente com uma atividade menor de serino proteinases. Esses dados nos levaram a transformar cana-de-açúcar com um novo inibidor de cisteíno proteinases denominado Chagasina. Esta proteína foi isolada em Trypanosoma cruzi e sua caracterização bioquímica revelou que ela é um inibidor de cisteíno proteases. Isto foi confirmado através de ensaios enzimáticos com a forma recombinante da proteína que exibiu potente atividade inibitória sobre as CPs presente nos tubos digestivos de S. levis. Construções gênicas contendo o gene Cha e o gene repórter NPTII foram utilizadas para transformação de calos embriogênicos de cana-de- açúcar via biobalística. Plantas selecionadas em meio contendo Geneticina foram submetidas a análises moleculares através de PCR, RT-PCR e Western Blotting que revelaram a integração e expressão do transgene em vários transformantes. Ensaios com extratos de plantas transgênias foram realizados com o objetivo de avaliar um provável efeito da Chagasina expressa em inibir as CPs de S. levis. Apesar da presença do inibidor nas plantas, não houve inibição da atividade de CP de S. levis, provavelmente em função de sua baixa expressão.