Transformação genética de laranjas \'Pera\' e \'Natal\' (Citrus sinensis L. Osbeck) com o gene atacina A (attA), dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema, para resistência a Candidatus Liberibacter spp.

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Oliveira, Carolina Rossi de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Atacina A; Attacin A; Citros; Citrus; Huanglongbing; Promoter; Promotores; Transgenia; Transgenic
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11144/tde-10112014-145643/

Atualmente o Brasil ocupa lugar de destaque entre os produtores de citros sendo o maior produtor de laranja doce do mundo. Entretanto, essa produção vem sendo gravemente afetada, por doenças como o huanglongbing (HLB), que tem causado perdas significativas para toda cadeia citrícola. O HLB está associado a bactérias Gram-negativas, restritas ao floema das plantas, denominadas Candidatus Liberibacter spp., que além de reduzir a produção de frutos, podem, em casos mais severos da doença, ocasionar a morte da planta. Uma importante estratégia para controle desta doença é a produção de plantas transgênicas expressando genes, especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi a obtenção de plantas transgênicas de Citrus sinensis cvs. \'Pera\' e \'Natal\', contendo o gene atacina A (attA) que codifica um peptídeo antibacteriano, dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema: AtSuc2 (transportador de sacarose) ou AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2) clonado de Citrus sinensis. A identificação de 65 plantas transgênicas foi realizada, por meio da análise de PCR. Foi verificado um número menor de eventos transgênicos, utilizando-se a construção gênica pCAtSuc2/attA em relação ao número de eventos transgênicos obtidos com as construções gênicas pCCsPP2/attA e pCAtPP2/attA. Plantas identificadas como transgênicas pela análise de PCR, foram aclimatizadas e transferidas para casa-devegetação certificada para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas que apresentaram desenvolvimento suficiente, confirmando-se a integração do gene attA. A expressão do gene attA foi confirmada pela análise de RT-qPCR. As plantas transgênicas obtidas neste trabalho, contendo o gene attA dirigido por promotores preferencialmente expressos no floema, serão avaliadas em uma etapa futura para resistência a Candidatus Liberibacter spp.