Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
1991 |
| Autor(a) principal: |
Fungaro, Maria Helena Pelegrinelli |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
|
| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
|
| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
|
| Departamento: |
Não Informado pela instituição
|
| País: |
Não Informado pela instituição
|
| Palavras-chave em Português: |
|
| Link de acesso: |
https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-20231122-093233/
|
Resumo: |
O coalho é uma mistura enzimática responsável pelo processo de coagulação do leite que é usado na fabricação de queijos. Ele é tradicionalmente isolado do quarto estômago de bezerros. O grande aumento no consumo mundial de queijos, associado ao alto custo do coalho animal, estimulou a busca de novas fontes de coalho. O presente trabalho teve como objetivo básico, desenvolver uma metodologia para o melhoramento genético de uma linhagem de Candida sp, uma levedura isolada do solo, a qual mostrou-se promissora para a produção de um substituto do coalho animal. As metodologias utilizadas para o melhoramento genético envolveram três ciclos de mutação-seleção, com o objetivo de aumentar a atividade coagulante e diminuir a atividade de outras proteases não específicas, que são responsáveis por causar sabor amargo ao queijo. A indução de variabilidade genética foi feita utilizando-se de irradiação ultravioleta em doses que permitiam 5% de sobrevivência. No primeiro ciclo de seleção, foram avaliadas 179 colônias (população C1); uma única colônia foi selecionada para dar origem, após mutagênese, à população C2, constituída de 70 colônias; este método foi repetido mais uma vez para dar origem ao terceiro ciclo seletivo. Ao final do terceiro ciclo de seleção, foi obtido um aumento de 98% para o caráter atividade coagulante e uma redução de 20% para o caráter atividade proteolítica. As metodologias utilizadas também permitiram estimar as variâncias genéticas e covariâncias ao nível das populações. Herdabilidade, progresso esperado com seleção e coeficiente de correlação genética entre atividade coagulante e atividade proteolítica foram igualmente estimados. Foi também objetivo deste trabalho, descrever o ciclo parassexual em Candida sp, uma vez que esta levedura não apresenta o ciclo sexual. Mutantes com duplas marcas auxotróficas foram obtidos após tratamento com a luz ultravioleta. Dois métodos foram utilizados para a seleção destes mutantes: o de enriquecimento com nistatina e o de isolamento total. O primeiro método mostrou rendimento cerca de quatro vezes maior em relação ao de isolamento total. As condições de obtenção e regeneração de protoplastos foram estabelecidas utilizando-se, inicialmente, a linhagem selvagem de Candida sp. Posteriormente, foi feita a fusão de protoplastos entre linhagens auxotróficas (pab bio e ura arg) com polietileno glicol. As colônias prototróficas formadas, foram selecionadas por complementação em meio mínimo. A partir de um produto de fusão nuclear selecionado, foram obtidos vários recombinantes monoauxotróficos, os quais apresentaram diâmetros nucleares semelhantes aos parentais. Este fato sugeriu que estes recombinantes auxotróficos se originaram por perdas cromossômicas. O ciclo parassexual descrito neste trabalho poderá ser útil, em futuros programas de melhoramento genético de Candida sp. |
