Desenvolvimento de um aptassensor para detecção de dengue

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Júnior, Bassam Bachour
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Aptamer; Aptâmero; Biosensor; Biossensor; Dengue; Eletrochemical impedance spectroscopy; Espectroscopia de impedância eletroquímica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-24032020-104846/

Entre as doenças negligenciadas estão as transmitidas pelo vírus pertencentes à família Flaviviridae, do gênero Flavivírus, causador da Dengue. Este é responsável pela produção de 10 proteínas, dentre elas a proteína não estrutural 1 (NS1), a única secretada e encontrada nos estágios iniciais da doença em fluidos biológicos, o que a transformou em um interessante biomarcador. Neste trabalho será abordado o desenvolvimento de um biossensor para detecção de NS1 utilizando,para isto, aptâmeros de DNA como elementos de reconhecimento biológico. Os aptâmeros são cadeias de DNA artifciais, quimicamente estáveis,com grande flexibilidade e com habilidade de \"folding\" ,para interagirem com alvos específcos. Para tanto, eletrodos de ouro foram funcionalizados por meio da co-imobilização de aptâmeros e 6-mercapto-1-hexanol(MCH), para análises impedânciométricas e aptâmeros com 6-ferrocenyl-hexanethiol(FCC),para as capacitivas, formando em ambos casos uma monocamada auto-organizada(SAM).A caracterização e detecção foram realizadas por meio das técnicas de espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) e da espectroscopia de capacitância eletroquímica(ECE), bem como de análises morfológicas via microscopia de força atômica(AFM). A plataforma sensível foi otimizada em função da densidade de recobrimento dos aptâmeros, assim como as soluções utilizadas. O limite de detecção foi obtido a partir da curva analítica para diferentes soluções contendo NS1 pelas técnicas: EIE, 1,29 e 1,22 pg/mL, e ECE,121,8 e 6,24 pg/mL, em tampão e soro humano comercial sem diluição, respectivamente. Estas medidas apresentaram uma boa sensibilidade para ambas técnicas de: EIE, 2,9 e 2,7% por década,e ECE, 3 e 4 nF por década,em tampão e soro comercial,respectivamente; bem como um alto grau de seletividade da NS1 em comparação com outras biomoléculas da Dengue como a Proteína do envelope E. Com isso ,o aptassensor é capaz de detectar NS1 na faixa clínica e apresenta potencial para o desenvolvimento de uma nova classe de dispositivos miniaturizados point-in-care.