Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2019 |
| Autor(a) principal: |
Silva, Isaura Beatriz Borges |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-15092023-094854/
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Resumo: |
O vírus Zika (ZIKV) é um vírus emergente transmitido por artrópodes (arbovírus) e tem causado grande preocupação global, particularmente devido às síndromes congênitas e neurológicas associadas a esse vírus. Os sintomas clínicos iniciais da maioria dos arbovírus são muito semelhantes, tornando o diagnóstico clínico incerto e o diagnóstico laboratorial por sorologia com baixa acurácia entre os vírus antigenicamente relacionados, o que resulta na subnotificação das doenças por eles causadas. O ZIKV pertencente ao gênero Flavivirus, da família Flaviviridae, que também inclui alguns outros patógenos humanos importantes, como o vírus da dengue (DENV). Nestas infecções, a caracterização da imunidade humoral por meio do uso de anticorpos monoclonais associado a estudos estruturais representa um componente importante no fornecimento de informações quanto ao perfil antigênico, sendo essencial para o desenvolvimento de novos métodos de diagnóstico, terapêuticos e vacinas efetivas. Diante disso, foi objetivo do presente estudo o emprego da técnica phage display usando uma biblioteca de genes de anticorpos humanos para seleção de anticorpos monoclonais contra o ZIKV. Foram realizadas duas estratégias de biosseleção, a primeira foi uma biosseleção direta contra partículas de ZIKV, na segunda foi realizada uma abordagem de subtrativa, aplicando etapas de seleção negativa e positiva contra o ZIKV e o DENV2, sorotipo de DENV mais circulante atualmente no país e o mais associado a casos severos dentre os sorotipos. Após os ciclos de biosseleção, foi realizado um Sequenciamento de Nova Geração (NGS) das regiões VH e VL do DNA fagomídeo e análise dos dados obtidos. Posteriormente, foi realizado o desenho de fragmentos variáveis de cadeia única (scFvs) seguido de análises in silico dessas estruturas. Os resultados obtidos indicam que foram selecionadas sequências VHs e VLs com elevado enriquecimento na biosseleção, sugerindo uma elevada afinidade ao ZIKV e DENV2. Além disso, na segunda estratégia, foi possível obter sequências na seleção para o ZIKV que não se manifestaram ao longo da seleção para DENV2 e vice-versa. As análises in silico sugerem as possíveis interações dos scFvs com a proteína E do ZIKV e algumas das propriedades envolvidas nessas interações. A partir disso, esperamos poder contribuir para geração de novas perspectivas para o desenvolvimento de plataformas diagnósticas mais precisas para o ZIKV, contribuindo para maior eficiência no controle epidemiológico e, assim, melhor controle de dispersão e medidas contra infecções pelo ZIKV. |
