Metabólitos secundários como potenciais inibidores de CDK8 (proteína quinase humana)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2018
Autor(a) principal: Almeida, Buana Carvalho de
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
CDK
Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-25042018-142801/
Resumo: Quinases Dependentes de Ciclinas (CDKs) são holoenzimas que possuem uma subunidade catalítica, a CDK, e uma subunidade regulatória, a ciclina. CDKs são Ser/Thr quinases, ou seja, fosforilam resíduos de aminoácidos específicos. A CDK8 fosforila o CTD da RNA Pol II, sendo considerada como regulador transcricional positivo, implicando em efeitos oncogênicos. Em suma, essas descobertas a colocam como alvo de drogas em pesquisas relacionadas ao câncer. Técnicas de biologia molecular foram realizadas a fim de obter o recombinate CDK8::pET28a. A CDK8-HisTag foi expressa em Rosetta(DE3), com cauda de histidina no N-terminal (45 kDa), no entanto a proteína foi expressa como corpos de inclusão. Desta forma, a CDK8-HisTag foi solubilizada com SDS 2%, o detergente foi completamente removido e o refolding da mesma foi obtido com cromatografia líquida de alta eficiência utilizando coluna de Ni2+. A proteína reenovelada e purificada foi analisada por DC e revelou a existência de 13, 6% de hélices α, 34,5 %d e folhas β e 33,1 % de coil. O espectro de emissão de fluorescência da CDK8-HisTag mostrou comprimento de onda máximo em torno de 360 nm. A análise de docking com potenciais inibidores obtidos da espécie W. brachypetala revelou o alcaloide O-metil-hyeronimona como potencial inibidor de CDK8. Este é o primeiro relato de expressão e purificação da proteína CDK8 em E. coli, assim como do screening virtual desta proteína na presença de inibidores naturais obtidos de W. brachypetala.