Estudo do receptor P2RX7 no estabelecimento de células T CD4+ residentes no pulmão em resposta a infecções locais

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Carvalho, Igor Santiago de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: CD4&#43 T cells; Células T CD4+ dano pulmonar; infecção pulmonar e P2RX7; Lung damage; Lung Infection and P2RX7
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-21062022-163100/

Em doenças infecciosas que afetam os pulmões, a resposta destas células pode gerar proteção ou agravamento. Na tuberculose causada pelo Mycobacterium tuberculosis, a resposta de células T CD4+ é regulada pelo próprio tecido pulmão, que controla a entrada excessiva destas células no parênquima pulmonar. Este é um mecanismo que evita danos aos órgãos que possuem baixa capacidade regenerativa. Contudo, algumas doenças graves podem induzir a entrada desregulada de células T, como em infecções por cepas micobacterianas hipervirulentas e pelo vírus Influenza. Neste contexto, ainda não se sabe o que regula a entrada destas células no tecido pulmonar durante estas infecções e suas consequências. Portanto, este estudo buscou compreender o papel das células T CD4&#43 residentes na geração de dano pulmonar e agravamento de infecções pulmonares e os mecanismos envolvidos nesse processo. Para isso, utilizamos modelos de infecções pulmonares graves induzidas por Mycobacterium bovis (MP287) e vírus Influenza (PR8). A infecção com a cepa MP287 induz lesão pulmonar grave que está associada a altos números de células T CD4+ residentes em camundongos C57BL/6 (WT). A depleção de células T CD4&#43 21 dias p.i. preveniu o agravamento da infecção. Em seguida, transferimos números intermediários (1x106) e altos (3x106) de células T CD4&#43 para camundongos Cd4-/- infectados. Como resultado, apenas os camundongos que receberam altos números de células T CD4&#43 desenvolveram tuberculose grave. A tuberculose grave induz a liberação de altos níveis de ATP extracelular (eATP) que é reconhecido pelo receptor purinérgico P2RX7. A interação eATP-P2RX7 é crucial para geração de células T residentes. Adicionalmente, o P2RX7 é altamente expresso em células T CD4&#43 residentes no pulmão durante a infecção por MP287. Por isso, avaliamos se a expressão de P2RX7 pode regular a residência de células T CD4&#43 durante a infecção por MP287. Camundongos P2rx7-/- e Cd4creP2rx7fl/fl foram infectados e desenvolveram tuberculose branda associada a baixos números de células T CD4&#43 residentes no pulmão. Após a co-transferência de células T CD4&#43 isoladas de camundongos WT e P2rx7-/- para camundongos Cd4-/- encontramos majoritariamente células T CD4&#43 WT no parênquima pulmonar, enquanto as células TCD4&#43 P2rx7-/- foram localizadas principalmente na vasculatura. Para avaliar se esse fenômeno é infecção específico ou não, utilizamos o modelo de infecção viral com a cepa PR8. A deficiência de P2RX7 em células T preveniu a inflamação grave e formação de fibrose no pulmão durante a infecção por PR8. Além disso, as células T CD4&#43 residentes estão reduzidas nos camundongos deficientes de P2RX7. Para entender quais as vias moleculares envolvidas neste fenômeno, as células T CD4&#43 residentes foram isoladas do pulmão 7 dias p.i. com PR8 p ara execução de um RNAseq. Os dados gerados demonstram que as células T CD4&#43 residentes deficientes em P2RX7 têm expressão reduzida de genes relacionados à migração e proliferação celular como: Cxcr3 e Mki67. Estes dados indicam que a interação eATP-P2RX7 no pulmão durante infecções induz o acúmulo de células T CD4 no tecido, aumentando a migração e proliferação destas células. Para entender qual é a fonte de eATP no tecido que as células T CD4&#43 utilizam durante a infecção por PR8, infectamos camundongos deficientes de Panexina-1 (Panx-1) total ou somente em células T. O número de células T CD4&#43 residentes no pulmão foi reduzido somente com a deficiência total de Panx-1. Portanto, estes dados indicam que o reconhecimento parácrino de eATP via P2RX7 regula a residência de células T CD4&#43 no pulmão, determinando o destino de doenças infecciosas locais.