Efeitos do silenciamento gênico de transformer-2 a partir da aplicação de RNAi parental em Anastrepha sp.1 affinis fraterculus (Diptera, Tephritidae)

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Vento, Pietro Enrico Vicari
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Determinação sexual; Fruit flies; Moscas-das-frutas; Pseudomacho; Pseudomale; Sex determination
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-20102016-164736/

As moscas-das-frutas são consideras pragas da fruticultura mundial, sendo que a espécie de maior importância econômica na região Neotropical é Anastrepha fraterculus. Sabe-se que na verdade A. fraterculus corresponde a um complexo de espécies crípticas; vários estudos têm se focado na caracterização destas espécies e no desenvolvimento de estratégias de controle populacional. Trabalhos anteriores mostraram que o silenciamento de genes envolvidos na determinação sexual de Anastrepha, como o transformer-2, constitui uma potencial ferramenta que pode ser usada em programas com este propósito, por gerar uma maior proporção de machos, uma vez que a proteína Transformer-2 funcional é necessária para o desenvolvimento do fenótipo feminino. Na ausência desta proteína um embrião XX se desenvolve com o fenótipo masculino (pseudomacho). Esse tipo de abordagem pode ser utilizado para otimizar a produção de moscas em biofábricas. Nesses estudos prévios o dsRNA foi injetado diretamente em ovos, o que constitui uma técnica de execução bastante complexa e que resulta em uma alta mortalidade durante o processo, inviabilizando sua utilização em um contexto aplicado. Aqui nós descrevemos os efeitos do silenciamento gênico de transformer-2 a partir da injeção parental de dsRNA em A. sp.1 affinis fraterculus, com o intuito de verificar se ocorre o silenciamento gênico na progênie. Para isso, fêmeas adultas foram injetadas com transformer-2 dsRNA em seu abdome e cruzadas com machos não tratados. Suas progênies foram coletadas ao longo de cinco semanas e analisadas quanto a (a) proporção sexual, (b) presença de pseudomachos (XX), (c) fertilidade dos machos e (d) morfologia sexual, além de análises de (e) emergência e de (f) assimetria de estruturas dos adultos, que são indicadores relevantes para a aplicação dessa técnica. A análise da proporção sexual mostrou um desvio significativo da proporção esperada de 1?:1? a favor dos machos, sendo o máximo desvio detectado entre as semanas 1 e 3 após a injeção. A análise dos cariótipos revelou a presença de pseudomachos (XX) na progênie. A maioria dos adultos apresentou morfologia das estruturas sexuais normal, exceto um pequeno número de indivíduos, que tinham gônadas assimétricas. Os testes de fertilidade revelaram que todos os machos apresentaram espermatozoides móveis em seus testículos, mas algumas fêmeas, referentes aos cruzamentos estéreis, não tinham espermatozoides em suas espermatecas. As análises de emergência dos adultos e assimetria de asas e mostraram que não há diferenças em relação ao controle, mas há aumento da assimetria de cerdas frontais da cabeça. Esses resultados indicam que alguns indivíduos da progênie de fêmeas injetadas com transformer-2 dsRNA foram afetados pelo silenciamento gênico de transformer-2. Além disso, as análises de morfologia e assimetria sugerem que esse tratamento causa perturbações no desenvolvimento desses organismos. Finalmente, os testes de fertilidade mostraram que alguns machos da progênie são funcionalmente estéreis, por serem incapazes de transferir espermatozoides para as fêmeas, possivelmente os pseudomachos (XX). A produção de uma progênie com maior número de machos a partir da interferência na expressão de um único gene pode ser bastante útil para melhorar o manejo da produção de machos em biofábricas