Expansão de células NK com atividade antitumoral: aplicações em imunoterapia adotiva e mecanismos imunológicos envolvidos

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Kerbauy, Lucila Nassif
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Células NK; Células NK de memória; Cord blood; Cordão umbilical; Memory like NK cells; NK cell
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-25112022-105558/

Tem-se, atualmente, especial interesse pelo uso de células Natural Killer (NK) para imunoterapia celular no tratamento de pacientes com doença hematológica maligna e tumores sólidos. No entanto, a transferência adotiva de células NK apresenta limitações, como dificuldade em se obter número suficiente de células para tratamento, persistência inadequada, fraca expansão in vivo e limitada atividade antitumoral das células infundidas. Assim, um desafio nesse campo é a obtenção de células NK em quantidade e qualidade apropriadas para a imunoterapia adotiva. Aqui, apresentamos uma proposta inovadora para a produção em larga escala de células NK provenientes do sangue de cordão umbilical (CB-NK), com aumento de atividade antitumoral. Baseado no fato de que as células NK de sangue periférico apresentam propriedade de memória com aumento de resposta antineoplásica quando estimuladas previamente por uma combinação de citocinas, nós estudamos esse efeito em CB-NK com a intenção de se desenvolver um produto alogênico facilmente disponível para o uso clínico. CB-NK foram submetidas a um breve período de pré-ativação com uma combinação de interleucina-12 (IL-12), IL-15 e IL-18, seguido de expansão usando células feeder K562, expressando IL-21 e CD137 na presença de IL-2 exógena. Células NK pré-ativadas e expandidas (P+E CB-NK) apresentaram aumento da citotoxicidade contra linhagens tumorais mieloides, blastos de pacientes com leucemia mieloide aguda e linfoide após 14 dias de expansão. Por meio de sequenciamento de RNA, observou-se que as células P+E CB-NK apresentaram perfil transcriptômico compatível com ativação de vias de sinalização relacionadas ao aumento da função efetora, mesmo 14 dias após a ativação com a combinação de citocinas. As células P+E CB-NK apresentaram, ainda, aumento de citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) em relação às células somente expandidas sem a fase de pré-ativação. As células NK pré-ativadas e expandidas também exibiram aumento da atividade antitumoral com estimulação do anticorpo biespecífico chamado AFM13. Após estável ligação com AFM13, essas células exibiram resposta antitumoral aumentada contra células tumorais de linfoma CD30 + in vitro e in vivo, em modelo experimental com camundongos NSG imunodeficientes. Coletivamente, esses dados identificaram a combinação de AFM13 com P+E CB-NK como uma estratégia promissora para o tratamento de doenças hematológicas CD30+.