Mutação no gene Aire induzida pelo sistema CRISPR-Cas9 em modelo murino in vitro (células epiteliais medulares tímicas): impacto na adesão intercelular e na apresentação de antígeno

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Cassiano, Ana Carolina Monteleone
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 3D cell culture; Adesão celular; Antigen presentation; Antigen processing; Apresentação de antígenos; Cellular adhesion; Cultura de células 3D; Esferoides; Gene Aire; IFNγ MHC II molecule; Molécula de MHC II; mTECs; Processamento de antígenos; Spheroids
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-26072024-133652/

Além de controlar a expressão de antígenos de tecidos periféricos, o gene regulador autoimune (Aire) regula a expressão de genes de adesão em células epiteliais tímicas medulares (mTECs), processo essencial para a interação mTECtimócito. Para que esse processo ocorra, é importante que a arquitetura tridimensional (3D) do timo preserve a camada medular. Camundongos delidos de Aire têm medula tímica desorganizada, não existindo estudos sobre a interação mTEC-mTEC. Neste estudo, avaliamos a adesão mTEC-mTEC em modelo de cultura 3D de timo e o processo de apresentação de antígeno de mTEC do tipo selvagem (WT) e mTEC delida de Aire (E6) no domínio NLS. As células E6 foram obtidas utilizando CRISPR-Cas9. A adesão mTEC-mTEC foi avaliada em modelo in vitro para a formação de esferoides em 3D. Para o ensaio de apresentação de antígeno, utilizamos células WT e E6 estimulada com IFNγ em cocultura com células esplênicas T CD4+ naïve de animais OT II apresentando receptor específico para o peptídeo OVA323-339, na presença ou não de células dendríticas. A ausência de Aire: i) desorganiza a estrutura 3D dos esferoides de mTEC, ii) aumenta a proporção de células na fase G0/G1 do ciclo celular, iii) aumenta a taxa de apoptose de mTEC, iv) diminui a força de adesão mTEC-mTEC, v) promove regulação diferencial dos marcadores de superfície clássicos de mTEC, vi) modula genes que codificam moléculas de adesão, vii) modula genes envolvidos na via de apresentação de antígeno após estímulo com IFNγ (MHC II, CIITA, CD74), e viii) não altera vias de processamento de antígeno na etapa lisossomal. Em contra partida, a transdução (superexpressão) do gene Aire inibe as respostas induzidas por IFNγ. Concluindo, mTECs E6 apresentam diminuição da adesão mTEC-mTEC, sendo este o primeiro estudo a abordar o tema. Embora as mTECs E6 apresentem antígenos de forma semelhante às WT, apenas algumas moléculas relacionadas à apresentação (MHC II e transativadores de moléculas MHC II) e ao processamento de antígenos (CD74) parecem estar sob a influência do gene Aire, no modelo estudado.