Estudo da cinética enzimática entre potenciais fármacos e cisteína-proteases por fluorimetria

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Cendron, Rodrigo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Chagas disease; cinética enzimática; cisteína proteases; cysteine proteases; doença de Chagas; enzymatic kinetics; fluorescence; fluorescência; Leishmaniasis; Leishmaniose
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75133/tde-17082022-165601/

O presente trabalho se dedica ao estudo da atividade inibitória de algumas moléculas orgânicas, desenvolvidas com o intuito de atuarem como fármacos, e seis enzimas da família das cisteíno proteases, empregando fluorimetria como método analítico. Estas atividades estão inseridas no contexto da busca de novos fármacos para o tratamento de diversas doenças, dentre as quais se destacam o Mal de Chagas e a Leishmaniose, que estão relacionados respectivamente aos ensaios com as enzimas Cruzaína e CPB. As cisteína proteases da família da papaína encontradas nos parasitas causadores destas doenças foram identificadas como essenciais para o seu ciclo de vida e, portanto, servem como alvos moleculares validados, pois a sua inibição poderia levar à morte seletiva do agente patogênico. Realizou-se também a expressão e a purificação da enzima Cruzaína, com o intuito de viabilizar os estudos com elas. As dipeptidilnitrilas têm sido estudadas nas últimas décadas como inibidores covalentes reversíveis de enzimas proteolíticas do tipo da papaína, com atuação seletiva e potente; juntamente a essa classe de substâncias, iniciou-se os testes com peptóides, que, apesar de serem uma classe inédita de substâncias apresentaram atividade inibitória. Neste trabalho, são empregadas técnicas analíticas com foco principal em medidas fluorimétricas, com o objetivo de estudar os efeitos das substâncias de interesse sobre os alvos moleculares. Os testes realizados com as Catepsinas L, K, S e B estão correlacionados à busca de inibidores com possível atividade farmacêutica sobre muitas enfermidades autoimunes e diversos tipos de câncer. No entanto, é importante mencionar que os estudos estão limitados aos estágios iniciais da pesquisa para uma substância bioativa inédita, etapa em que são realizados os ensaios in vitro dos possíveis fármacos com o alvo molecular, para tanto, serão empregadas técnicas fluorimétricas para o estudo da cinética de inibição enzimática, buscando determinar a capacidade inibitória dos possíveis fármacos e, também, extrair informações sobre os alvos moleculares através da busca da relação entre a estrutura química e a atividade dos inibidores, contribuindo, assim, para o desenvolvimento da pesquisa de forma mais geral.