Propriedades bioquímicas e cinético-enzimáticas de cisteíno- proteases do intestino médio da lagarta da soja

• Ano de defesa: 2008
• Autor(a) principal: Mendonça, Eduardo Gomes de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Soja; Lagarta da soja; Cisteíno-proteases; Soybean; Velvetbean caterpillar; Cysteine-proteases; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::ENZIMOLOGIA
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2394

Inibidores de protease que atuam em proteases específicas de insetos são candidatos para terem seus códigos genéticos inseridos em plantas geneticamente modificadas. Um primeiro passo para se alcançar isso é a caracterização das enzimas proteolíticas do intestino desses insetos. Cisteíno-proteases da Fração solúvel e da Fração insolúvel do intestino médio de Anticarsia gemmatalis foram caracterizadas utilizando o substrato L-BApNA. A Fração solúvel, chamada de Fração I, foi obtida do sobrenadante após nove ciclos de congelamento e descongelamento do intestino de A. gemmatalis e a Fração insolúvel, chamada de Fração II, obtida da maceração com o detergente Brij 35 do pellet resultante da Fração I. Verificaram-se dois valores de pH com pronunciada atividade em ambas as Frações, sendo eles pH 3,6 e 8,0 para a Fração I e 4,6 e 8,0 para a Fração II. Já o pico de atividade quando testada a influência da temperatura foi em 35oC para a Fração I e 60°C para a Fração II. O KM app encontrado para as Frações I e II foram de 2,28 mM e 0,44 mM respectivamente. A Vmáx app para as respectivas Frações foram 297,68 nM.s-1 e 122,95 nM.s-1. Quatro inibidores de proteases foram testados, sendo cada um deles de uma classe de protease: TLCK (inibidor de serino-protease), E-64 (inibidor de cisteíno-protease), EDTA (inibidor de metaloprotease) e Pepstatina A (inibidor de aspartil- protease). A inibição mais pronunciada foi verificada quando E-64 foi adicionado ao meio para ambas as Frações, uma vez que todas as concentrações testadas diminuíram significativamente a atividade de cisteíno-protease. Um aumento de TLCK no meio fez com que a atividade de cisteíno-protease caísse gradativamente devido à reação desse com resíduo de aminoácido histidina na tríade catalítica, o qual faz parte de tríade de cisteíno-protease também. O efeito de EDTA na atividade de cisteíno-protease de A. gemmatalis sobre L-BApNA mostra a diferença entre as duas Frações analisadas. A Fração I não depende de íons divalentes como Ca2+ para sua atividade. Já a Fração II é cálcio-dependente, pois EDTA diminuiu significativamente sua atividade. Pespstatina A não influenciou cisteíno-proteases da Fração I, exercendo pouca influência na Fração II.