Pesquisa de Giardia spp., Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis em água para consumo humano

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Marciano, Maria Aparecida Moraes
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Água; Biologia molecular; Molecular biology; Outbreaks; Protozoa; Sanitary surveillance; Surto de doenças; Vigilância sanitária; Water
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/99/99131/tde-19122019-123455/

Segundo normas do Ministério da Saúde, toda água destinada ao consumo humano, distribuída coletivamente por meio de sistema ou solução alternativa de abastecimento, deve ser objeto de controle e vigilância. O monitoramento adequado, aliado a técnicas capazes de detectar as diferentes espécies de microrganismos fornece informações importantes sobre a fonte de infecção durante surtos epidêmicos. Estas informações contribuem para as ações de manejo e adequada tomada de decisões de gestores em saúde pública. O presente estudo teve como objetivo padronizar e implantar metodologias microscópicas e moleculares de detecção de Giardia spp, Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis em águas destinadas ao consumo humano. Estes protozoários são considerados os mais prevalentes em surtos epidêmicos de veiculação hídrica, entretanto, o estudo e monitoramento dos mesmos são dificultados por condições intrínsecas das amostras de água. Foram padronizadas as determinações de protozoários em água para consumo humano pela avaliação dos métodos microscópicos e moleculares. Para as padronizações foram utilizados protozoários provenientes de fezes humanas (Cryptosporidium spp. e Giardia spp.), felinas (T. gondii) e DNA de C. cayetanensis. A seguir foi padronizado cada passo da PCR convencional (cPCR) e da PCR em tempo real (qPCR) (extração de DNA, iniciadores moleculares e reação de amplificação). Visando aumentar a sensibilidade, especificidade e diminuir o risco de contaminação após a amplificação do DNA foram padronizadas duas semi-nested PCR em tubo único, para Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os resultados mostraram que os protocolos de extração e amplificação adotados foram eficientes para a detecção desses patógenos, em amostras de água para consumo humano e podem ser aplicadas na rotina laboratorial, no atendimento de surtos epidêmicos.