Estudos bioquímicos e biofísicos de esterases de Bacillus licheniformis e suas possíveis aplicações biotecnológicas

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Leite, Ana Elisa Tognoli
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bacillus licheniformis; Aplicações biotecnológicas; Biochemical characterization; Biotechnological applications; Caracterização bioquímica; Esterase
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-09092021-120640/

Lipases e esterases bacterianas são enzimas capazes de realizar a hidrólise de triacilgliceróis. Essa classe de enzima apresenta atividade em diferentes solventes orgânicos e possui diversas aplicações biotecnológicas como em aditivos para detergentes, biossurfactantes e ainda nas indústrias de papel e alimento. Neste trabalho foram realizadas a expressão heteróloga e purificação de duas esterases de Bacillus licheniformis (BlEstA e BlEstB) assim como as suas caracterizações bioquímica, biofísica, cristalização, e estudo de sua possível aplicação como bioemulsificante e na degradação de biofilme bacteriano. A expressão foi realizada em meio lysogeny broth (LB) e a purificação por meio de técnicas cromatográficas de afinidade e cromatografia de exclusão molecular. Através da caracterização bioquímica foi determinada uma temperatura ótima de 30°C, um pH ideal 9,0 e a melhor atividade em p-nitrofenil-octanoato para a BlEstA. Para a BlEstB foi obtido uma temperatura ótima de 50°C, um pH ideal 7,0 e a melhor atividade em pNP- butirato. Através da técnica de ThermoFluor e análise de estabilidade térmica dessas enzimas foi possível detectar uma maior estabilidade na presença de altas concentrações de NaCl. Nos testes de índice de emulsificação E24 foi observado que ambas as enzimas apresentam boa capacidade de emulsificação, atingindo mais de 50%. Quando aplicada na degradação de biofilmes, ambas as enzimas se mostraram capazes de atuarem tanto no tratamento quanto na prevenção do crescimento desse biofilme. Através desses resultados podemos entender melhor as características dessas enzimas e descobrir, a partir disso, possíveis aplicações em indústrias, ou áreas biotecnológicas e médicas no tratamento de biofilmes.