Caracterização fenotípica do camundongo mutante bate palmas induzido pelo agente mutagênico químico ENU (N- Ethyl- N- Nitrosourea) como potencial modelo para a síndrome de Kabuki

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Oliveira, Nicássia de Sousa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: kmt2d gene; Behavior; Comportamento; Deficiência motora; Doença genética; Gene kmt2d; Genetic disease; Motor deficit; Mutação; Mutation
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-01122017-162348/

O camundongo mutante denominado bate palmas (BALB/cbapa) originou-se de mutagênese química induzida por N-ethyl-N-nitrosourea (ENU). Suas principais características fenotípicas são alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando suspenso pela cauda, simulando o ato de bater palmas. A partir do padrão de herança a mutação foi identificada como autossômica recessiva. Os resultados do sequenciamento do exoma apontaram como forte candidato o gene lysine (K)-specific methyltransferase 2D (kmt2d, também conhecido como mll2 ou mll4), localizado no cromossomo 15 do camundongo. Essa mutação foi confirmada através de sequenciamento do DNA pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D, localizado no cromossomo 12 em humanos, foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, que é uma anomalia congênita rara, autossômica dominante, também conhecida como síndrome Niikawa-Koruki. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, alterações dermatoglíficas, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente estudo teve como objetivo caracterizar o fenótipo do camundongo mutante bate palmas a partir da análise de parâmetros comportamentais. Para tanto, foram utilizados 30 camundongos mutantes bate palmas- sendo 15 machos e 15 fêmeas- e seus respectivos controles BALB/c, com oito semanas de idade no início dos experimentos. Os testes comportamentais foram realizados em ordem crescente de estresse e ordenados na seguinte sequência 1) observação direta em campo aberto dos parâmetros da atividade geral, sensoriais, psicomotores e os ligados ao sistema nervoso central e autônomo; 2) ansiedade e memória no teste do labirinto em cruz elevada; 3) memória operacional no teste do labirinto em T; 4) coordenação motora no teste da trave elevada e 5) comportamento do tipo depressivo nos testes de suspensão pela cauda e natação forçada. Os dados obtidos no presente estudo demostraram que o mutante bate palmas apresentou aumento na frequência de levantar em ambos os sexos, sugerindo comportamento estereotipado; no entanto, não houve alteração na atividade geral. Na avaliação do sistema sensorial houve redução no reflexo auricular e na resposta de aperto de cauda do mutante bate palmas. Em relação aos parâmetros psicomotores houve diminuição do reflexo de endireitamento e queda do trem posterior, sugerindo deficiência motora, como a hipotonia. Os resultados do teste de labirinto em cruz elevada identificaram menor nível de ansiedade nos mutantes em comparação aos controles. Ainda, as respostas observadas no segundo dia do teste mostraram que não houve perda de memória dos bate palmas. Além disso, o teste do labirinto em T mostrou que não houve alteração na memória espacial dos camundongos mutantes em relação aos BALB/c. Já os resultados dos testes de suspensão pela cauda e de natação forçada foram semelhantes, indicando maior tempo de imobilidade dos mutantes em comparação aos BALB/c. Analisados em conjunto, os resultados desse estudo sugerem que o mutante bate palmas apresentou alterações nos parâmetros sensoriais e psicomotores e possível comportamento estereotipado, relacionadas à mutação do gene kmt2d.