Avaliação do papel dos microRNAs na imunopatogênese da microcefalia causada pelo Zika vírus em modelos experimentais

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Polonio, Carolina Manganeli
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: astrocitos; astrocytes; autofagia; autophagy; CZS; microRNAs; neurodesenvolvimento; neurodevelopment; SCZ; susceptibility; suscetibilidade; Zika virus
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-15022023-161314/

O Zika Virus (ZIKV) e um flavivirus que causa comprometimento neurologico caracterizando a Sindrome Congenita do ZIKV (SCZ). Embora as celulas precursoras neuronais e os neurônios sejam as celulas mais afetadas, os astrocitos sao mais suscetiveis a infeccao pelo ZIKV, uma vez que toleram maiores cargas virais, sofrem menos apoptose e sao utilizados para replicação viral. Varios reguladores de processos biologicos estao envolvidos na suscetibilidade a SCZ, incluindo os microRNAs (miRNAs). Os miRNAs sao pequenos RNAs nao codificantes que interagem com sequencias alvo de mRNA complementares para repressao pos-transcricional. Nesse contexto, o objetivo principal e investigar as interacoes miRNAs-mRNA durante a transmissao vertical do ZIKV, com foco em astrocitos. Primeiramente, demonstramos que o ZIKV aumenta a expressao miRNAs no cerebro total de camundongos neonatos nascidos de maes infectadas, estimulando a autofagia. A regulacao positiva do miR-295 limita a expressão do gene regulador da autofagia Bcl2l11 in vivo e em astrocitos in vitro. Alem disso, comparando o perfil de miRNAs em astrocitos primarios de camundongos SJL, observamos o aumento da expressao dos miR-295 e miR-302d. Utilizando plataformas bioinformaticas, mimetizadores e inibidores dos miRNAs, e ensaio de luciferase, demonstramos que os genes Ahrr, Neurod4 e Neurod6 sao regulados negativamente pelos miR-295 e miR-302d. Curiosamente, os miR-295 e miR-302d sao transcritos juntamente com os genes Nlrp12 e Larp7, respectivamente. E para entender melhor o mecanismo usado pelo ZIKV para induzir estes miRNAs, avaliamos fatores que levam a transcricao dos genes Nlrp12 e Larp7. De modo interessante, o ZIKV aumentou a expressao dos fatores de transcricao CEBP/b e da subunidade p65 de NF-kB. Corroborando, o ZIKV induziu o recrutamento de CEBP/b para o promotor de Nlrp12 e Larp7 e p65 para o promotor de Larp7. Ainda, a inibicao de Rela e Cebpb por siRNAs, diminuiu Nlrp12, Larp7, premiR-295, premiR-302d, miR-295 e miR-302d, enquanto aumentou a expressao dos genes Ahrr, Neurod4 e Neurod6. Em seguida, demonstramos que a ativação dessa via descrita e um mecanismo de suscetibilidade a SCZ, uma vez que nao observamos aumento da expressao de Cebpb, Rela, Nlrp12, premiR-295, Larp7, premiR-302d, miR-295 e miR-302d, e dos seus genes alvos, Ahrr, Neurod4, Neurod6 em astrocitos de camundongos C57BL/6 WT resistentes a microcefalia causada pelo ZIKV. Dessa forma, demonstramos que o ZIKV ativa os fatores de transcricao C/EBPb e NF-kB para aumentar a transcricao de Nlrp12 e Larp7 e, consequentemente, dos miR-295 e miR-302d em astrocitos SJL. Estes miRNAs levam a diminuicao da expressao dos genes Ahrr, Neurod4 e Neurod6, contribuindo para o desenvolvimento de SCZ em camundongos SJL suscetiveis, mas nao em camundongos C57BL/6 WT resistentes. Em conjunto, sugerimos um mecanismo de suscetibilidade ao desenvolvimento da SCZ.