Biotecnologias para avaliação da viabilidade e criopreservação de gametas do coral endêmico Mussismilia harttii (VERRILL, 1868)

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Cruz, Nayara Oliveira da
• Orientador(a): Fischer, Vivian
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Criopreservação; Produção animal; Coral
• Palavras-chave em Inglês: Mussismilia harttii; Cryopreservation; MTT; Brazilian coral; Cytometry; Conservation
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/247548

Os recifes de coral constituem um dos ecossistemas mais diversos do planeta, exercendo um papel fundamental na manutenção dos recursos pesqueiros que mantem diversas comunidades humanas em todo o mundo. No entanto, os fatores antrópicos e mudanças ambientais vem ocasionando severos danos a este ecossistema. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas que visem sua conservação é fundamental, entre elas, o uso da criopreservação seria uma ferramenta alternativa para a manutenção de novos corais. O objetivo desse trabalho foi desenvolver biotecnologias para avaliar a viabilidade dos gametas do coral endêmico M. harttii, e desenvolver um protocolo de criopreservação para armazenamento do gameta masculino por tempo indeterminado, criando assim o primeiro banco de gametas de coral do Atlântico Sul. Para a avaliação da viabilidade oocitária, foi utilizado o teste de brometo de azul de tiazolil tetrazólio (MTT) e o teste de azul de tripano (TB). Os testes de TB foram realizados em duas condições. Inicialmente os oócitos foram expostos a 1, 3, 5, 7 e 9 mol-1 de dimetilsulfóxido (DMSO) por 20 min, depois incubados em 0,4% de TB e tiveram sua integridade de membrana avaliada. Posteriormente, os oócitos mortos foram incubados em TB diluído em água do mar filtrada ou dodecil sulfato de sódio (SDS). Para experimentos de MTT, um ensaio de diluição em série foi realizado usando DMSO como composto citotóxico. O TB conseguiu atravessar a membrana do oócito, mas devido ao seu alto teor de lipídios, a observação da coloração azul não foi possível, inviabilizando este teste para oócitos de M. harttii. Conseguimos padronizar o ensaio MTT para determinar a atividade mitocondrial em oócitos maduros do coral, e consequentemente avaliar sua viabilidade. Através do ensaio MTT descobrimos a diluição de DMSO que nos permitiu definir uma concentração segura (1,4 M) para trabalhar com oócitos de coral. O protocolo para a criopreservação das células espermáticas foi desenvolvido o melhor crioprotetor, concentração e técnica de criopreservação. Os espermatozoides foram expostos ao crioprotetor dimetilsulfóxido e metanol em concentrações de 10, 15 e 20%. Os espermatozoides foram criopreservados com sucesso em DMSO 20% usando congelamento lento. De modo geral, como resultados desse trabalho alcançamos um método confiável para avaliação da viabilidade de oócitos e um protocolo eficiente para congelamento do sêmen de M. harttii. Essas ferramentas biotecnológicas poderão ajudar na preservação da diversidade genética, e assegurar a existência dos recifes de coral.