Vitrificação de tecido ovariano de Zebrafish (Danio rerio) encapsulado em hidrogel de alginato de sódio

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Freitas, Thaiza Rodrigues de
• Orientador(a): Streit Júnior, Danilo Pedro
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Danio rerio; Óvulo; Alginato; Criopreservação
• Palavras-chave em Inglês: Alginate; Ovarian tissue; Zebrafish; Cryopreservation; Fish oocyte
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/249132

O zebrafish (Danio rerio) é um importante modelo animal e tem se destacado na pesquisa biomédica por sua homologia fisiológica e genética aos humanos. Com isso, diversas linhagens e animais de grande valor genético têm sido desenvolvidos, possuindo assim, grande necessidade de sua preservação. No entanto, a criopreservação de oócitos de peixe ainda é limitada e necessita aprimoramento. O hidrogel de alginato de sódio além de fornecer suporte para as células, tem demonstrado ser um potencial crioprotetor. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da técnica de encapsulamento em hidrogel de alginato de sódio durante o procedimento de vitrificação do tecido ovariano de zebrafish. No Experimento 1, foram avaliados a forma de encapsulamento (imersão ou em 30 μL de alginato), o momento de exposição ao crioprotetor (antes ou após o encapsulamento) e a temperatura de aquecimento (28, 37 e 50oC) e foi avaliada a integridade da membrana pela coloração azul de tripan. Os dados mostraram que o tecido ovariano encapsulado por imersão, exposto ao crioprotetor após o encapsulamento e aquecido a 28oC, apresentou maior integridade de membrana em todas as fases de desenvolvimento dos oócitos (PG: 37.71 ± 3.86 %; CA: 29.93 ± 4.18 %; Vtg1: 18.61 ± 4.69 %) e foi utilizado no Experimento 2. No Experimento 2 foram avaliados quatro grupos vitrificados (VS: Metanol 1,5 M + Me2SO 5,5 M + sacarose 0,5 M; VS1-A: Metanol 1,5 M + Me2SO 5,5 M + sacarose 0,5 M - encapsulado em alginato; VS2-A: Metanol 0,75 M + Me2SO 2,75 M + sacarose 0,25 M - encapsulado em alginato; VA: encapsulado em alginato) e foram avaliados a integridade da membrana (SYBR- 14/PI), morfologia (histologia – HE), atividade mitocondrial (MTT) e peroxidação lipídica (TBARS). O tratamento VA demonstrou menor percentagem de integridade de membrana, enquanto VS demonstrou maior integridade de membrana no qual não diferenciou do tratamento VS1-A. A atividade mitocondrial foi maior no tratamento não encapsulado (VS) e os tratamentos encapsulados tiveram menor valor. O tratamento VA obteve o maior nível de peroxidação lipídica, enquanto VS1-A e VS obtiveram os menores valores no qual VS não se diferenciou do tratamento VS2-A. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que a técnica de encapsulamento em hidrogel de alginato de sódio não teve ação crioprotetora e não permitiu a redução da concentração de crioprotetores. No entanto, a partir de observações durante os experimentos, foi encapsulamento dos fragmentos de tecido ovariano em hidrogel de alginato, possibilitou suporte e evitou perda de células durante o processo de vitrificação.