Análise ex vivo do potencial antifúngico da molécula plumieridina em Cryptococcus neoformans

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Barcellos, Vanessa de Abreu
• Orientador(a): Vainstein, Marilene Henning
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Cryptococcus neoformans; Cryptococcus gattii; Criptococose; Virulência
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/202670

Criptococose é uma infecção fúngica invasiva causada pelas espécies patogênicas Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Esta doença afeta aproximadamente 200.000 indivíduos mundialmente. A alta incidência de mortalidade por meningoencefalite criptococócica associada a problemas de toxicidade, resistência e escassez de terapias antifúngicas torna necessária a pesquisa por novos fármacos. Nosso grupo identificou o potencial terapêutico de um iridóide, plumieridina, isolado do extrato aquoso de sementes de Allamanda polyantha (apocinácea). Sendo assim, o objetivo desse estudo é avaliar as atividades biológicas do composto plumieridina contra C. neoformans. Nós propusemos o uso de um modelo prático para avaliar a eficácia desse composto como tratamento para a criptococcose. Nossa estratégia aborda a infecção de camundongos com uma linhagem fluorescente de C. neoformans, seguida de uma análise de órgãos colonizados baseada na fluorescência. Camundongos foram infectados intranasalmente com linhagens fluorescentes de C. neoformans e tratados com plumieridina ou fluconazol durante 14 dias. Os pulmões e o cérebro foram excisados e examinados no equipamento IVIS LUMINA II, para quantificação da fluorescência e determinação de unidades formadoras de colônia (UFC). A análise por imagem demonstrou uma redução da carga fúngica cerebral e pulmonar de camundongos infectados com C. neoformas. Além disso, para identificar possíveis alvos de plumieridina, estudos in silico foram realizados utilizando o servidor pharmMapper. Entre os alvos preditos, três proteínas envolvidas na via das pirimidinas foram identificadas, timidilato-sintase, orotidine-5’-fosfato-descarboxilase e diidroorotato-desidrogenase. As estruturas de timidilatosintase e orotidina-5’-fosfato-descarboxilase de C. neoformans foram modeladas e submetidas à técnica de docking molecular com a molécula plumieridina, para melhor entender os mecanismos de interação com C. neoformans. Plumieridina interage com os aminoácidos no centro catalítico das enzimas. Além disso, o perfil de expressão de genes de C. neoformans relacionados à via das pirimidinas na presença de plumieridina também foi avaliado por PCR em tempo real (RT-qPCR). Uma diminuição significativa nos níveis de transcrição dos genes da timidilato sintase e da orotidine-5’-fosfato-descarboxilase foi detectada quando as células foram cultivadas na presença de plumieridina. Nossos resultados podem contribuir para descrição e desenvolvimento de novos antifúngicos para o tratamento da criptococose.