Estudo de novos componentes da via de sinalização mediada por cálcio e calcineurina em Cryptococcus neoformans

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Tavanti, Andrea Gomes
• Orientador(a): Silva, Lívia Kmetzsch Rosa e
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Cryptococcus neoformans; Criptococose; Virulência
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/276118

Cryptococcus neoformans é uma levedura basidiomicética, principal agente etiológico da criptococose em humanos. A forma mais grave desta doença, denominada meningoencefalite criptocócica, tem incidência global de 220.000 casos e causa aproximadamente 181.000 mortes anualmente. A via de sinalização mediada por cálcio e calcineurina tem papel essencial na adaptação criptocócica às condições encontradas no hospedeiro durante o desenvolvimento da doença. O objetivo deste trabalho foi explorar esta via de sinalização em busca de novos possíveis componentes que impactam a virulência de C. neoformans. Inicialmente, realizamos uma análise in silico de dados brutos transcritômicos de RNA-seq relacionados a três mutantes nulos para produtos gênicos chave desta via: fosfatase calcineurina, fator de transcrição Crz1, e transportador de cálcio Pmc1. Após uma análise integrada de redes de interação entre os genes diferencialmente expressos por biologia de sistemas, selecionamos CNAG_00522 como um novo potencial membro da via cálcio-calcineurina. Este gene é comum às redes geradas para os mutantes pmc1Δ e cna1Δ, e é regulado positivamente por esses componentes. Buscas por domínios conservados revelaram a presença de um domínio relacionado a C2B_Tricalbin, o qual tem conexão a módulos de direcionamento de membrana dependentes de Ca2+ que ligam diferentes moléculas, como fosfolipídios, polifosfatos de inositol e proteínas intracelulares. No intuito de aprofundar a caracterização funcional de CNAG_00522, avaliamos os níveis de transcritos deste gene por RT-qPCR em amostras de cDNA de C. neoformans obtidas de linhagens selvagem (WT) e mutantes (pmc1Δ e crz1Δ) cultivadas em diferentes condições de temperatura e presença e ausência de cálcio. Observamos que a expressão de CNAG_00522 é regulada positivamente a 37oC, e o fator de transcrição Crz1 é um potencial regulador negativo da expressão deste gene. Análises funcionais baseadas na deleção de CNAG_00522 devem ser conduzidas no intuito de confirmar a participação deste gene na via de sinalização mediada por cálcio e calcineurina, assim como avaliar o papel deste componente na virulência de C. neoformans.