Sreening de uma biblioteca com potenciais moléculas Acaricidas

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Ozelame, Katiussa Paula Cover
• Orientador(a): Vaz Junior, Itabajara da Silva
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Carrapatos; Glutationa S-transferases
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/257922

Introdução: Carrapatos são ectoparasitos hematófagos responsáveis pela transmissão de diversos agentes patogênicos. O controle químico continua sendo o método mais eficaz para a supressão do parasita, mas o uso de acaricidas leva a seleção de populações resistentes de carrapatos. O aumento da biodegradação do acaricida por enzimas detoxificadoras, como as glutationa S-transferases (GST), é um dos mecanismos de resistência, por biotransformar compostos tóxicos, facilitando a eliminação dessas moléculas. Objetivo: Analisar in vitro o efeito de compostos sintéticos sobre a atividade da enzima GST de cinco diferentes espécies de carrapato: Rhipicephalus microplus (RmGST), Haemaphysalis longicornis (HlGST), Amblyomma variegatum (AvGST), Rhipicephalus decoloratus (RdGST) e Rhipicephalus appendiculatus (RaGST). Métodos: Para expressar as enzimas GST em sistema heterólogo de Escherichia coli (E. coli) na forma recombinante, foi utilizado plasmídeo pET-43 contendo as ORF (open reading frames) que codificam as GST de cada espécie. As proteínas foram purificadas através de cromatografia de afinidade à glutationa e testadas para os substratos CDNB (1,2-dicloro-4-nitrobenzeno) e DCNB (3,4-dicloronitrobenzeno) na presença do co-substrato glutationa. Inicialmente, foram testadas 60 moléculas com relação aos efeitos na atividade da enzima rRmGST. Os compostos que apresentaram inibição maior que 50% foram testados contra as GST de outras espécies de carrapato: rHlGST, rAvGST, rRdGST e rRaGST. Resultados e discussão: As GST recombinantes com massa molecular de 25 kDa foram expressas a 30 oC com 1 mM de IPTG e purificadas por cromatografia de afinidade à glutationa. Todas as enzimas tiveram atividade com o substrato CDNB, mas não contra DCNB. O composto 795 apresentou uma capacidade de inibição de 58,1% para rRmGST, 27,8% para rAvGST, 2,3% para rHlGST, 23,9% para rRdGST e 31,9% para rRaGST, enquanto o composto 1258 inibiu em 59,4% a atividade da rRmGST, 6,2% darAvGST, 24,3% da rHlGST, 1,9% da rRdGST e 100% da rRaGST. A moléculas sintéticas 795 e 1258 pertencem às classes químicas dos curcominoides e esteroides, respectivamente. Conclusão: Os resultados identificaram um grupo de possíveis compostos com potencial de ser usado para o controle do carrapato, necessitando de mais estudos para melhor avaliação deste efeito.