Detecção e análise genômica do vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV) e do girovírus aviário 2 (AGV2)

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Varela, Ana Paula Muterle
• Orientador(a): Roehe, Paulo Michel
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Filogenética; Vírus : Anemia : Galinhas; PCR : Aves; Vacinas; Girovírus aviário
• Palavras-chave em Inglês: Gyrovirus; Phylogenetic analysis; Real-time PCR; Vaccine
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/196932

O vírus da anemia infecciosa das galinhas (CAV) é um vírus pequeno, não-envelopado, com genoma circular de DNA simples fita. O vírus foi identificado pela primeira vez em 1979 no Japão e, por mais de 30 anos era o único girovírus conhecido por infectar aves. Em 2011, um novo girovírus, denominado girovírus aviário 2 (AGV2) foi identificado em soros de aves apáticas e com perda de peso. Posteriormente, genoma desse novo vírus foi identificado em aves saudáveis, bem como aves com sinais clínicos neurológicos. Especula-se que o AGV2 esteja mundialmente disseminado nos rebanhos avícolas, uma vez que genoma viral tem sido identificado em países geograficamente distantes. Tal identificação de AGV2 tem sido baseada em testes moleculares qualitativos. Dessa forma, no primeiro estudo realizado, foi desenvolvida uma duplex PCR em tempo real (dqPCR) visando detectar e quantificar simultaneamente genomas de CAV e AGV2. O ensaio mostrou ser sensível, específico e reproduzível, permitindo a detecção de no mínimo 5 cópias de genoma de CAV e 50 cópias de AGV2. Além disso, a dqPCR foi mais sensível que a técnica convencional quando aplicada para detecção destes agentes em amostras biológicas. O ensaio foi também utilizado para avaliar a presença de genomas de CAV e AGV2 em vacinas comerciais frequentemente utilizadas na avicultura. Trinta e cinco vacinas comerciais produzidas contra diferentes agentes patogênicos de aves foram analisadas. Os resultados obtidos mostram a presença de genoma de ambos os girovírus nas vacinas e enfatizam a importância da investigação aprofundada destes agentes em imunógenos. Adicionalmente, visando ampliar o conhecimento sobre o AGV2, dois estudos envolvendo análise genômica (parcial ou completa) foram realizados. Em um dos estudos, possíveis variações na sequência que codifica a proteína viral 1 (VP1) foram investigadas em amostras coletadas de aves com distintos status sanitários. Para tanto, penas coletadas de aves saudáveis e fígados provenientes de aves com apatia e baixo ganho de peso foram submetidos à extração de DNA e amplificação da região que codifica a VP1. Os produtos amplificados foram sequenciados e filogeneticamente analisados. Análise filogenética à nível de aminoácido deduzido permitiu a subdivisão das sequências de AGV2 em dois grupos maiores relacionados ao distinto status sanitário. Esses resultados podem estar associados à ocorrência de variantes do vírus, bem como à patogenicidade. Por fim, outro estudo foi realizado com o objetivo de detectar e caracterizar genomas de AGV2 presente em aves na Itália. Cem soros foram coletados de aves comerciais, aparentemente saudáveis, oriundas de 10 propriedades da região do Vêneto. As amostras de soro foram submetidas à extração de DNA e à detecção de AGV2 utilizando PCR. DNA viral foi identificado em 5 das 10 propriedades analisadas. Assim, um DNA extraído de soro representante de cada propriedade foi selecionado e submetido à amplificação do genoma completo de AGV2, sequenciamento e análise filogenética. Foi obtida uma sequência genômica completa e quatro sequências parciais do genoma. Os genomas aqui identificados apresentaram organização genômica igual aos demais girovirus conhecidos, com exceção dos girovírus 4 e 5. Além disso, a análise filogenética realizada mostrou que AGV2 e HGyV são filogeneticamente relacionados e formam um grupo distinto dentro do gênero Gyrovirus.