Perfil metabólico de células humanas de adenocarcinoma de pulmão sensíveis e resistentes à cisplatina

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Cadore, Nathan Araujo
• Orientador(a): Monteiro, Karina Mariante
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: eng
• Palavras-chave em Português: Adenocarcinoma de pulmão; Expressão gênica; Bioenergética
• Palavras-chave em Inglês: Lung cancer; Gene expression; Bioenergetic
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/276249

O câncer de pulmão é o tipo de câncer mais incidente e o líder em causas de morte em todo o mundo. O tratamento padrão para pacientes com câncer de pulmão é a quimioterapia, sendo a cisplatina (CDDP) uma das drogas mais utilizadas. Contudo, a resistência do câncer à CDDP é frequente. A resistência à CDDP é um processo complexo e multifatorial. O fitness celular e diferentes trade-offs bioenergéticos adotados pela célula são exemplos de fatores determinantes na resistência. Estudos prévios do grupo de pesquisa identificaram potenciais alterações bioenergéticas e estratégias de crescimento em células resistentes à CDDP. Portanto, o presente estudo avaliou o perfil metabólico e a regulação de vias bioenergéticas de células sensíveis e resistentes à CDDP. Para isso, células com resistência adquirida à CDDP (A549/CDDP) foram desenvolvidas a partir da exposição de células da linhagem parental A549 a concentrações crescentes da droga. Após, análise da expressão gênica de genes relacionados ao metabolismo foi realizada por RT-qPCR. A dependência por fontes energéticas e efeito de agentes anti- e pró-oxidantes foram avaliados por ensaio de proliferação ou clonogênico. O efeito de inibidores glicolíticos foi avaliado por ensaio de citotoxicidade. Parâmetros do consumo de O2 mitocondrial foram avaliados por respirometria de alta resolução. A expressão do fator de iniciação eucariótico eIF2α e de 4E-BP1 e a fosforilação destes foram avaliadas por western blot. Células A549/CDDP apresentaram regulação negativa de genes evolvidos com o metabolismo de glicose e L-glutamina, além da regulação positiva do inibidor de glicólise TIGAR (TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator), indicando redução da atividade destas vias metabólicas. Também, células resistentes à CDDP apresentaram maior dependência à glicose e L-glutamina para a proliferação. O inibidor 2-DG apresentou maior citotoxicidade em células resistentes, sendo uma consequência da redução de enzimas glicolíticas. Além disso, células A549/CDDP apresentaram respiração mitocondrial reduzida, caracterizando menor atividade da mitocôndria. As linhagens apresentaram semelhança na resposta a agentes anti- e pró-oxidantes, indicando possível semelhança quanto ao equilíbrio redox. Por fim, 4E-BP1 apresentou uma redução na razão da isoforma fosforilada 4E-BP1 (Thr37/46) por 4E-BP1 hipofosforilada em células A549/CDDP. Assim, uma possível regulação global da tradução em células A549/CDDP pode estar atuando como um mecanismo de resistência. Em conjunto, este trabalho descreve uma redução geral do metabolismo em células resistentes à CDDP, possível consequência de uma redução global da tradução. Com isso, o melhor entendimento destas vias na resistência à CDDP poderá proporcionar melhores prognósticos e tratamentos alternativos para o câncer de pulmão.