Perfil da atividade de macrófagos in vitro, frente às amostras virulenta, atenuada e saprófita de leptospira spp

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Araujo Junior, Erivelto Corrêa de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Leptospiras; Resposta Imune; Citocinas; Apoptose; Trancriptoma; Immune Response; Cytokines; Apoptosis; Transcriptome
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/180544

O objetivo do presente trabalho foi verificar a dinâmica da resposta imune celular in vitro utilizando-se cultivos de macrófagos de camundongos (J774A.1) quando expostos às amostras virulenta, atenuada e saprófita de Leptospira, observados nos períodos de 1h, 3h, 6h, 12h, 24h, 36, 48h e 72h após a exposição. Foram realizados ensaios que determinaram a produção de intermediários reativos do nitrogênio (NO), expressão de genes para citocinas e interleucinas, pela técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) e a presença e quantificação das mesmas no sobrenadante do cultivo celular pelo teste ensaio imunoenzimático (ELISA). Avaliam-se as diferenças na modulação da expressão gênica do hospedeiro por cepas de Leptospira com variados graus de virulência, pelo método do microarranjo. Os resultados demonstraram que as amostras virulenta e atenuada proporcionaram um estímulo maior aos macrófagos em comparação à amostra saprófita, principalmente na fase tardia da infecção, considerando-se os valores expressos por óxido nítrico (NO), óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e induzido (iNOS). Os valores, embora estatisticamente não significativos, apresentaram uma dinâmica maior à resposta de citocinas (TNF-α, IL-1β) pela amostra virulenta em comparação à atenuada e saprófita. Outro fator relevante foi o encontro de Caspase-3 e -8 na fase inicial da infecção, sugerindo que a apoptose dos macrófagos ocorreu no começo do processo, logo após a internalização das Leptospiras, atingindo níveis elevados às 24 horas, com pico máximo, às 72 horas. Após análise transcriptômica, os resultados mostraram um alto número de genes diferencialmente expressos após 6h de infecção por L. interrogans virulenta e atenuada, e em menor proporção com a linhagem saprófita L. biflexa. Isto sugere que RNAs são modulados após a infecção por Leptospira em macrófagos, independente do grau de virulência. Os dados produzidos neste estudo, contribuirão para melhor compreensão da patogênese da leptospirose.