Desreguladores endócrinos versus Ginsenosídeos: modulação da via não genômica ativada por GPR30 e estresse oxidativo em células de Sertoli humanas (HSeC)

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Freitas, André Teves Aquino Gonçalves de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Panax ginseng; GIM-1; HSeC; GPR30; estresse oxidativo; Células de Sertoli; Barreira hematotesticular; Desreguladores endócrinos; Monobutil ftalato; Sertoli cells; Blood-testis barrier; Endocrine disruptors; Monobutyl phthalate; HSec; Oxidative stress
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/181639

Citocinas e proteínas quinases são fundamentais para o controle do processo espermatogênico, estando diretamente envolvidas na dinâmica da barreira hematotesticular. Diferentes mecanismos de controle são modulados por receptores como o GPR30, que ativa rapidamente diferentes vias de sinalização, responsáveis pelos processos de proliferação, sobrevivência e morte celular. Os desreguladores endócrinos (DEs) possuem grande afinidade pelo GPR30, além de potencial para ativar vias de estresse oxidativo e a abertura da barreira. Antagonistas funcionais dos DEs, como o Panax ginseng, podem ser protetores contra seus efeitos. Considerando a importância das vias de sinalização que regulam a espermatogênese e a constante exposição ambiental aos DEs a que estamos submetidos, este trabalho objetiva estudar a possível modulação da via não genômica ativada por GPR30 e do estresse oxidativo em células de Sertoli expostas a baixas doses do DE Monobutil Ftalato (MBP) bem como o potencial papel citoprotetor do GIM-1 (metabólito do P. ginseng) sobre essas células. Para tal, as células de Sertoli humanas (HSec) foram mantidas sobre matriz artificial, simulando o ambiente in vivo. A exposição ao MBP e ao GIM-1 foi realizada nos tempos de 30min, 1, 12, e 48 horas, em doses pré-estabelecidas pelo ensaio do MTT (teste de toxicidade) em 4 grupos: controle, MBP, GIM-1 e MBP + GIM-1. A morfologia celular foi avaliada pela coloração com Hematoxilina e Eosina, evidenciando efeitos deletérios do MBP sobre a distribuição celular e adesão na membrana basal; O grupo GIM-1 foi semelhante ao controle e o MBP+GIM-1 apresentou um aspecto intermediário. Para avaliar o estresse oxidativo, os marcadores enzimáticos glutationa peroxidase, superóxido dismutase e catalase foram analisados por método colorimétrico, sendo o MBP capaz de reduzir a atividade das três enzimas e o GIM-1 de aumentá-las e atenuar os efeitos do MBP no grupo MBP+GIM-1. A quantificação de proteínas por Western Blot mostrou que o MBP inibiu a expressão de NRF2 e aumentou a de caspase 3 clivada, ativou o receptor GPR30, PKA, Src, EGFR e a via da ERK1/2, enquanto o GIM-1 aumentou a expressão de SIRT1 e NRF2 e inibiu PKA, Src e as vias da ERK1/2 e AKT. O MBP também aumentou a expressão da Cofilina, diminuindo a intensidade de actina-F na superfície celular. A exposição combinada evidenciou o antagonismo entre os compostos. Nossos resultados mostram efeitos deletérios do MBP na linhagem HSec, através do estresse oxidativo e da via do GPR30, evidenciando o importante papel citoprotetor da GIM-1 sobre eles.