Implicações em saúde pública para diferentes técnicas diagnósticas e análise genotípica para Leishmania spp.

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Palmeira, Aghata Regina de Oliveira Alves
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Leishmaniose; Diagnóstico molecular; High Resolution Melting; Leishmaniasis; Molecular diagnosis
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/237446

As leishmanioses são zoonoses causadas por protozoários do gênero Leishmania, consideradas doenças negligenciadas e um grave problema de saúde pública, causando prejuízos sociais e econômicos em países tropicais e subtropicais. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Leishmania spp. em cães e animais silvestres, provenientes do estado de São Paulo por meio do crescimento primário e isolamento do parasito na cultura; Teste rápido imunocromatográfico (TR-DDP); ensaio imunoenzimático (ELISA); Reação em Cadeia da Polimerase convencional (cPCR); Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR); análises de dissociação de DNA em alta resolução (HRM) e posteriormente sequenciamento genético para identificação das espécies não discriminadas no HRM. De um total de 191 amostras biológicas, 180 (94,2%) eram procedentes de cães e 11 (5,8%) de animais silvestres. Das 180 amostras biológicas caninas, 32 (17,8%) foram cultivadas em meio NNN-LIT, tendo-se observado uma (3,1%) amostra de aspirado de linfonodo positiva. Todas as amostras caninas foram reagentes no TR-DDP e ELISA. A detecção molecular na técnica cPCR, utilizando os primers LINR4/LIN19, amplificou 151/191 (79,1%) amostras, já a qPCR amplificou 72/191 (37,7%) amostras utilizando primers HSP70F/R. Por meio da técnica de HRM, utilizando o amplicon 1, 55/191 (28,8%) amostras foram discriminadas como Leishmania infantum. Os resultados dessa pesquisa evidenciaram a identificação da espécie Leishmania infantum em 53/180 (29,4%) amostras procedentes de cães domésticos, e 2/11 (18,2%) amostras de animais silvestres. Desse modo, o estabelecimento de protocolos otimizados de detecção e identificação dos agentes causadores das leishmanioses torna-se extremamente útil para os estudos epidemiológicos.