Perfil transcricional do câncer de mama em cadelas por sequenciamento de nova geração

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Santos, Driéle Bretones dos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Cadelas; Carcinoma ductal mamário; Transcriptoma; Female dogs; Transcriptome
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/235686

As neoplasias mamárias são frequentes em cadelas não castradas, representando até 46% dos casos de câncer nesses animais no Brasil. Cães podem ser um ótimo modelo de estudos sobre cânceres de mama já que estes animais e humanos compartilham características fisiológicas, histológicas e genômicas, além de apresentarem semelhanças quanto ao desenvolvimento, comportamento clínico e vias moleculares da doença. Análises comparativas do transcriptoma de tecidos tumorais e normais podem identificar genes e vias moleculares desreguladas, permitindo, a médio prazo, o desenvolvimento de ensaios laboratoriais para uso no diagnóstico, ou, a longo prazo, indicar potenciais alvos terapêuticos para medicina humana e canina. Nesse contexto, o objetivo principal do presente estudo foi, a partir do sequenciamento de nova geração (NGS), determinar o perfil transcricional de amostras de carcinomas ductais mamários em cadelas, buscando esclarecer a relevância dos transcritos desregulados nas vias moleculares envolvidas na doença. Para tanto, utilizou-se amostras de carcinoma ductal mamário e do tecido mamário não tumoral adjacente, provenientes da mastectomia radical de seis (6) cadelas, de diferentes raças e idades, atendidas pelo serviço de Cirurgia de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da FMVZ-UNESP em Botucatu. O RNA total de cada amostra foi extraído, quantificado e submetido a análise de qualidade. Posteriormente, essas amostras foram reunidas em pools correspondendo a quatro grupos (dois tumorais e dois normais). Utilizou-se cada pool para a construção de uma biblioteca de cDNA, que, então foi sequenciada na plataforma NextSeq 500 System (Illumina, EUA). O resultado do sequenciamento foi encaminhado para análises de qualidade, limpeza e alinhamento ao genoma de referência, assim, identificando-se os transcritos diferencialmente expressos. Foram encontrados 11.278 genes dentre os, aproximadamente, 36.930 genes do genoma de referência de cachorro. Ao serem comparadas as amostras tumorais e o tecido normal adjacente, foram encontrados 1.206 genes diferencialmente expressos, sendo 633 regulados negativamente (downregulados) e 573 regulados positivamente (upregulados), os quais foram capazes de diferenciar os grupos pela PCA (Principal Component Analysis). A partir da análise de ontologia genética foram identificadas vias inflamatórias, de diferenciação e adesão celular e manutenção da matriz como as principalmente desreguladas nessa casuística. A maioria dos genes upregulados mais destacados estão envolvidos na organização da matriz extracelular, através da deposição de colágeno, vasculogênese mimética e da capacidade de invasão das células por meio da transição epitélio-mesenquimal. Ainda, os principais genes diferencialmente expressos observados no presente estudo, indicam maior agressividade da doença e pior prognóstico, destacando-se os dez genes mais upregulados. Finalmente, o estudo do transcriptoma canino parece indicar ser este um ótimo modelo para gerar informações relevantes à oncologia nas duas espécies.