Diversidade genética de Anaplasma marginale em bovinos amostrados em Itú, estado de São Paulo

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Garcia, Amanda Barbosa [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Anaplasmose bovina; Diversidade genética; Genótipo; Microbiologia; Bovine anaplasmosis; Genetic diversity
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/192584

Anaplasma marginale é uma bactéria, Gram negativa, intracelular obrigatória parasita de eritrócitos e o principal agente da Anaplasmose bovina. Esta doença causa anemia severa, provocando a redução do ganho de peso e da produção de leite e gerando grandes perdas econômicas na pecuária mundial. A diversidade genética desta bactéria vem sendo caracterizada com base na sequência das proteínas de superfície (MSPs), principalmente, na proteína MSP1α, sendo possível identificar as diferentes estirpes geográficas de acordo com as diferenças nas sequências de aminoácidos. O presente estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos de corte da raça Angus naturalmente infectados durante um surto da enfermidade. Vinte bovinos, com idades entre 6 e 9 meses, oriundos de uma fazenda no município de Itú, estado de São Paulo foram acompanhados por quatro meses e quatro colheitas de sangue foram realizadas. Amostras de soro foram submetidas à Ensaio Imunoenzimático Indireto (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti-A. marginale. As oitenta amostras de sangue total obtidas, foram submetidas à extração de DNA, PCR em tempo real quantitativa (qPCR) para o gene msp1β, semi-nested PCR (snPCR) para o gene msp1α, clonagem do fragmento alvo e sequenciamento pelo método de Sanger. As sequências obtidas foram submetidas à analises de diversidade genética pelo software RepeatAnalyzer. O ensaio Imunoenzimático Indireto (iELISA), utilizando Ag total, revelou baixa soroprevalência (22,5%) nos animais amostrados apesar de 100% de positividade na qPCR, com quantificação entre 103 e 107 número de cópias de DNA/μL, mostrando uma possível imunossupressão causada pela presença do patógeno. Na snPCR, baseada no gene msp1α, 57,5% (46/80) das amostras mostraram-se positivas. A análise de microssatélites de 36 sequências obtidas mostrou a presença do genótipo H (58,3%), F (25%), E (19,4%), C (2,7%) e G (2,7%). Através do programa Repeat Analyzer foram identificadas várias estirpes na regiao estudada, algumas delas nunca antes descritas na literatura, como 13 27 13 27 13 F; 16 F F; τ 27; 63 29 104 29; LJ1 13 LJ1 13; 16 F 17; 16 F 91 entre outras. Foi encontrada alta diversidade genética da bactéria A. marginale circulando nos animais estudados, identificando mais de uma estirpe circulante em um mesmo animal.