Avaliação da teneurina-2 em astrócitos reativos no modelo experimental de epilepsia induzida com cloreto de lítio-cloridrato de pilocarpina em ratos adultos. Análises imunoistoquímica, histoquímica e de expressão gênica

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Tessarin, Gestter Willian Lattari [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Astrócitos reativos; Epilepsia; Cloridrato de Pilocarpina; Ratos adultos; Teneurina; Reactive astrocytes; Epilepsy; Pilocarpine; Adult rats; Teneurin
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/191385

As teneurinas (Tens) são proteínas transmembrana do tipo II, constituídas de quatro membros homólogos (Ten-1-4). Estas proteínas são expressas principalmente durante a neurogênese do sistema nervoso central (SNC) e estão envolvidas primariamente no estabelecimento dos circuitos neuronais. Tens apresentam vários sítios de clivagens intracelular e extracelular que resultam em peptídeos bioativos, destacando-se os peptídeos associados aos terminais carboxila das teneurinas (Teneurin C-terminal-Associated Peptides, TCAPs). As latrofilinas (LPHN1-3) representam receptores associados à proteína G, sendo os principais receptores endógenos das Tens. A interação da Ten-2 com a LPHN-1 resulta na modulação nos níveis de cálcio intracelular, fato este que pode estar desbalanceado durante episódios epileptogênicos. O principal propósito deste estudo foi verificar possíveis alterações na imunorreatividade e na expressão gênica da Ten-2 no SNC em um modelo de epilepsia induzida por cloreto de lítio-cloridrato de pilocarpina em ratos adultos. Adicionalmente, as expressões gênicas do TCAP-2 e LPHN1 também foram analisadas, visto que são as principais proteínas correlacionadas à Ten-2. Para isto, ratos adultos (Rattus norvegicus; n=49) foram submetidos a indução de status epilepticus (SE) com cloreto de lítio (127 mg/kg) e cloridrato de pilocarpina (40 mg/kg) e divididos em grupos controles, grupos 2, 5 e 14 dias após SE e grupos epilepsia crônica (35 e 75 dias). Amostras do SNC destes animais foram submetidos à técnica imunoistoquímica para identificação da imunorreatividade semelhante à Ten-2 (teneurin-2- like-immunoreactive, Ten-2-LI), assim como combinado com a técnica histoquímica com o corante Fluoro-Jade C para evidenciação de degeneração neuronal e analisados em microscopias de campo claro ou confocal à laser para mapeamento e avaliações semi-quantitativa e quantitativa. Amostras do RNA total da área somatossensorial primária e do hipocampo também foram avaliadas pela técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR). Os dados quantitativos destas analises foram submetidos aos testes de normalidade e homocedasticidade, seguido da análise de variância simples (ANOVA) e pós-teste de Tukey, considerando p < 0,05 como significante. A análise imunoistoquímica revelou significante aumento na expressão da Ten-2-LI em perfis de astrócitos reativos na área somatossensorial primária, córtex piriforme, hipocampo, amígdala, tálamo, além de outras áreas telencefálicas e diencefálicas, principalmente nos grupos de 2 e 5 dias após SE. Os perfis de astrócitos reativos Ten-2-LI estavam presentes nas mesmas regiões encefálicas exibindo degeneração neuronal. Além disso, significante aumento nas expressões gênicas da Ten-2, TCAP-2 e LPHN1 também foram observadas na área somatossensorial primária e hipocampo, especialmente nos grupos de 2 e 5 dias após SE. O presente estudo demonstrou um significante aumento na Ten-2 e de suas proteínas correlatas no SNC de ratos adultos, após a indução do SE ou epilepsia crônica.