Influência de haplótipos no gene interleucina 8 em células com função imune

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Pigossi, Suzane Cristina
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Expressão gênica; Polimorfismo genético; Doenças periodontais; Gene expression; Genetic polymorphism; Periodontal diseases
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/152305

Estudos realizados por nosso grupo investigaram polimorfismos no gene Interleucina 8 (IL8) em 500 indivíduos com e sem periodontite e identificaram que o haplótipo ATC/TTC conferiu 2 vezes maior suscetibilidade à doença periodontal crônica (DP) em comparação com o haplótipo ATT/TTC. Estudos clínicos revelaram que indivíduos portadores do haplótipo no gene IL8 associado à DP, mesmo com baixo desafio microbiano, desenvolviam periodontite de maneira mais exacerbada quando comparados aos indivíduos portadores do haplótipo não associado à DP. No entanto, a funcionalidade biológica desses haplótipos no gene IL8 ainda não foi investigada por meio de controlados ensaios in vitro. A proposta deste estudo é avaliar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL8 em células imunes, incluindo a investigação por meio da regulação da expressão do gene repórter presente em plasmídeos recombinantes construídos artificialmente (constructos). Foi coletado sangue periférico de pacientes que carregam cada haplótipo e estimulados com mediadores inflamatórios e bactérias periodontopatogênicas para se avaliar a expressão gênica (mRNA, RT-qPCR), proteínas secretadas (Multiplex), perfil fenotípico celular (Citometria de fluxo), fagocitose e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) por macrófagos (Citometria de fluxo) e potencial de migração de linfócitos e neutrófilos. Constructos contendo cada haplótipo foram transfectados em linfócitos T humanos (células JM) e a expressão do gene repórter GFP foi avaliada utilizando citometria de fluxo. Os indivíduos portadores do haplótipo suscetível (ATC/TTC) apresentaram maiores níveis de IL-8, TNF-α (mRNA e proteína), IL-1β, IL-2R, IFN-γ, MIP-1α, MIP-1β e RANTES (proteína). Polarização significativamente maior para o fenótipo Th1/M1 foi observada para o haplótipo 15 suscetível enquanto que o haplótipo não suscetível (ATT/TTC) foi associado a uma resposta atenuada aos periodontopatógenos, com inclinação para o fenótipo Treg. Uma porcentagem mais elevada de macrófagos produtores de ROS tende a ocorrer em indivíduos portadores do haplótipo suscetível, assim como maior migração de neutrófilos após estímulo com IL-8 nesses indivíduos. Em relação à análise dos constructos contendo cada haplótipo isoladamente, foi observado que a presença do alelo T na região promotora foi a condição mais relevante no direcionamento da atividade transcricional do promotor de IL8. Em conclusão, os haplótipos no gene IL8 mostraram-se funcionais para a regulação da resposta imune frente aos periodontopatógenos e aos estímulos inflamatórios.