Resposta de Citrus sinensis superexpressando os genes PtPAO, CsBiP, e CsICS à infecção por 'Candidatus Liberibacter asiaticus'

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Rampim, Bruno Thomaz
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Oxigenase; Melhoramento genético; Proteína de ligação; Genética vegetal
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/253032; https://orcid.org/0000-0002-5450-5632

A bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) é o agente causal do HLB (Huanglongbing), uma das mais sérias doenças que acomete os citros. Até então, não se conhece resistência a esta bactéria dentro do gênero Citrus ou mesmo moléculas bactericidas. Plantas transgênicas de citros foram obtidas expressando os genes CsBiP (immunoglobulin-heavy-chain-binding protein), PtPAO (pheophorbide a oxygenase) e CsICS (Isochorismate synthase), os quais estão envolvidos na resposta de estresse celular induzido por fatores bióticos e abióticos. Os genes PAO e BiP foram identificados em condições de regulação positiva em Poncirus trifoliata (genótipo tolerante ao HLB) durante a infecção por CLas e o gene ICS identificado em Citrus sinensis como um possível ativador da resistência sistêmica adquirida (SAR) em resposta a infecção por bactérias. O objetivo desse estudo é avaliar a resposta à infecção por CLas de plantas transgênicas de laranjas doce superexpressando os citados genes. Eventos transgênicos das variedades ‘Pineapple’ e ‘Hamlin’ de laranja doce foram propagados e posteriormente inoculados com borbulhas fontes de CLas. A confirmação, via PCR, das primeiras plantas infectadas com CLas se deu aos 120 dias após a inoculação (dai). No período de 180 a 360 dai, estimou-se a concentração de CLas através de qPCR e acompanhou-se a emissão e severidade dos sintomas. Ao final dos 360 dai, folhas foram selecionadas das plantas inoculadas e não inoculadas para os genes PtPAO e CsBiP para a quantificação de H2O2 e teor de clorofila, e foi realizada a análise de expressão dos genes PtPAO e CsBiP. Os primeiros sintomas foram observados após 180 dai para os eventos dos genes PtPAO e CsBiP. Para o gene CsICS os primeiros sintomas apareceram aos 240 dai e foi observado número menor de plantas infectadas ao final de 360 dias de experimentação. Diferenças na concentração bacteriana foram observadas para os eventos PtPAO 13A e CsICS4-4, os quais apresentaram menores concentrações de CLas quando comparados ao controle não transgênico. Destacam-se o evento 13B (PtPAO) que apresentou diferença significativa para quantificação de H2O2, com valores menores ao controle, e o evento 1A (CsBiP), ambos contendo maior teor de clorofila, maior expressão do transgene e menor severidade de sintomas da doença. Para o gene CsICS destaca-se o evento 4-4, o qual só foi infectado ao final do experimento, apresentou menor concentração bacteriana quando comparado com o controle não transgênico e não apresentou sintomas típicos do HLB. Alguns eventos (PtPAO 13B, CsBiP 1A e CsICS 4-4) apresentaram uma melhor resposta à infecção por CLas, tendo-se registrado neste as menores concentrações da bactéria e menor severidade de sintomas de HLB, com menores reduções na concentração de clorofila quando comparado as plantas não transformadas. No entanto, são necessárias mais análises para obter resultados mais conclusivos.