Análise da expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais em células epiteliais orais normais e neoplásicas promovida por metabólitos de biofilmes simples e misto de Candida albicans e Staphylococcus aureus

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Amaya Arbeláez, Maria Isabel
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Candida albicans; Staphylococcus aureus; Biofilmes; Câncer oral; Metabólitos; Biofilms; Oral cancer; Metabolites.
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/202403

A microbiota oral desempenha um papel importante, tanto no microbioma humano como na saúde. Os micro-organismos presentes na cavidade bucal têm a capacidade de produzir metabólitos e toxinas, gerando relação disbiótica com o hospedeiro e levando ao desenvolvimento de diversas patologias. A inflamação crônica produzida pelo estímulo bacteriano, a inibição da apoptose e produção de espécies reativas de oxigênio, tem sido descritos como mecanismos de ação da microbiota oral na tumorigênese de cabeça e pescoço. Dados do nosso grupo de pesquisa evidenciam que metabólitos derivados de biofilmes simples e misto de Candida albicans e Staphylococcus aureus, são capazes de promover resposta inflamatória e morte celular de queratinócitos orais normais. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais em células epiteliais orais normais (NOK-si) e neoplásicas (SCC 25 e Detroit 562) estimuladas com metabólitos (fatores solúveis) provenientes de biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. aureus. Para a obtenção dos fatores solúveis (FS) produzidos pelos micro-organismos, foram formados biofilmes jovens e maduros simples e mistos de C. albicans e S. aureus, com 16 e 36 horas de cultivo, respectivamente. Os FS foram coletados e incubados com as células epiteliais orais. Primeiramente, foi realizado o ensaio de viabilidade celular por AlamarBlueTM e a morfologia celular foi observada por microscopia confocal para determinar o tempo de exposição das linhagens celulares aos FS dos biofilmes. Realizou-se a análise de perfil do ciclo celular por citometria de fluxo. A análise da expressão de proto-oncogenes e genes supressores tumorais foi realizada por qRT-PCR. Em geral, a exposição aos FS de biofilmes de C. albicans e misto causou redução na viabilidade das células NOK-si e aumento na fase sub G0 do ciclo celular, com diminuição da expressão gênica em HRAS, BRAF, MEK1, AKT, mTOR,TP53, CDKN1A, CDKN1B. No entanto, nesta linhagem, os FS de biofilmes simples de S. aureus produziram uma superexpressão do gene CDKN1A e Bcl-2, seguido pela manutenção da viabilidade celular, e um aumento significativo da população G2/M. Nas células tumorais, SCC 25 e Detroit 562, os estímulos dos FS provenientes dos biofilmes, regularam positivamente proto-oncogenes como HRAS e mTOR, bem como a superexpressão de Bcl-2 e CDKN1A. As células tumorais apresentaram capacidade de sobrevivência mesmo após 24 h de estímulo com FS de 16 h e 36 h, sem mudanças significativas na progressão do ciclo celular para a linhagem SCC 25 e com uma tendência significativa de aumento de fase G2/M, para a linhagem Detroit 562. Os resultados mostraram que metabólitos provenientes de biofilmes fúngicos e bacterianos de C. albicans e S. aureus, tanto jovens como maduros, são capazes de geram alterações ligadas ao processo de tumorigênese, devido à capacidade de promover alterações na viabilidade, dinâmica do ciclo celular e na expressão de genes pro-tumorais e supressores tumorais em linhagens epiteliais orais normais e neoplásicas.