Estudos estruturais com a Importina-α de Leishmania major e sequência de localização nuclear de proteína do metabolismo de Leishmania

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Fukuda, Cintia Akemi
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Biologia molecular; Cromatografia líquida de alta eficiência; Proteínas recombinantes; Importin-alpha; Protein chromatography; Recombinant protein; Leishmania major; NLS peptide
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/213491

A comunicação entre o núcleo celular e o citoplasma acontece por mecanismos de transporte que permitem a passagem de moléculas por poros presentes no envoltório nuclear. Dentre as vias de transporte entre o núcleo e o citoplasma celular conhecidas, a chamada Via Clássica de Importação Nuclear é a mais bem caracterizada. Nessa via, a proteína Importina-α (Impα) se liga às proteínas que serão transportadas ao núcleo a partir do reconhecimento de sequências de localização nuclear (NLS). A estrutura da proteína Impα já foi elucidada e caracterizada em alguns organismos. Atualmente estas proteínas são classificadas em três subfamílias: α1, α2 e α3. As diferenças entre as proteínas Impα de cada família evidenciam as especificidades destas no reconhecimento de NLSs, dependendo do organismo e função que exercem. Ou seja, uma mesma região da proteína pode apresentar variações na afinidade e no modo de ligação quando interage com Impα de famílias distintas. A leishmaniose é uma doença presente em diversas regiões do Brasil e no mundo. Novos casos da doença vêm aumentando progressivamente e por isso a Organização Mundial da Saúde (OMS) tem incentivado a busca de novos alvos para desenvolver drogas que eliminem eficazmente o parasita. Estudos prévios realizados por nosso grupo e outros mostraram que algumas proteínas são encontradas exclusivamente em parasitas da família Trypanosomatidae, como por exemplo a proteína Rbp38, que está envolvida em diversas atividades no núcleo celular. Desta maneira, o estudo do mecanismo de importação nuclear desta família de parasitas pode representar um importante alvo na busca por novos alvos moleculares no combate à leishmaniose. Assim, este trabalho teve como objetivo avançar no entendimento do transporte de proteínas de leishmania para o interior do núcleo celular. Para tanto, produzimos Impα recombinantes de Leishmania major (LmImpα), Mus musculus (MmImpα) e Homo sapiens (HsImpα) para obter informações comparativas através de técnicas biofísicas. Utilizamos também técnicas bioinformáticas para obter informações sobre um possível modelo do complexo formado da LmImpα com a NLS da proteína Rbp38.