Decorrências da duplicação de genes de proteínas ribossômicas em Leishmania

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Borges, Francisca dos Santos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Extraribosomal function; Função extraribossômica; Leishmania major; Proteína ribossômica; Ribosomal protein
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-06052022-145701/

No parasito Leishmania, a maioria dos genes que codificam proteínas ribossômicas (RPs) estão presentes como duas ou mais cópias e seus transcritos apresentam regiões codificadoras (CDSs) idênticas ou similares e, na maioria dos casos, com regiões não traduzidas (UTRs) divergentes. A divergência nas UTRs pode estar associada a uma regulação de expressão distinta para cada CDS, e as divergências internas às CDSs, por sua vez, podem resultar em diferenças funcionais entre parálogos. Recentemente, as RPs foram reportadas exercendo funções extrarribossômicas (Moonlighting) em diveros organismos. Nesse contexto, nos propomos a investigar proteínas ribossômicas no parasito Leishmania. Analisamos o produto de dois genes que codificam para RPs e que estão duplicados no genoma de L. major. Esses produtos consistem em duas proteínas ribossômicas presentes no genoma como duas cópias; (i) RPS16 (RPS16_80 e RPS16_90), que apresentam transcritos com CDS idênticas e UTRs divergentes e (ii) RPL13 (RPL13_15 e RPL13_34), com divergência internamente às CDSs e UTRs. Durante nosso trabalho geramos como ferramentas de estudo, parasitos portando cada uma das proteínas etiquetadas e nocautes para cada RP, utlizando o sistema de edição genômica CRISPR/Cas9. Nossos dados revelam que: 1) a expressão de cada isoforma de RPS16 e de RPL13 difere ao longo do desenvolvimento do parasito, sendo uma das isoformas mais expressa que a outra; 2) há um mecanismo de compensação de parálogos, na ausência de uma das isoformas, de RPS16 e de RPL13, a outra tem sua expressão aumentada, e 3) A viabilidade celular frente a estresse nutricional está aumentada para cada um dos quatro nocautes, de RPS16 e RPL13, comparativamente à linhagem controle. Além disso, com as ferramentas geradas nesse trabalho, buscamos identificar modificações póstraducionais nas duas RPL13 ainda que sem sucesso. Em conclusão, nosso trabalho criou ferramentas essenciais para entender melhor o significado funcional da duplicação de genes codificadores de duas proteínas ribossômicas em Leishmania.