Estudos estruturais com miotoxinas fosfolipase a2-like isoladas e recombinante da peçonha de bothrops pauloensis

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Zamboni, Bruna Maria
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Proteína recombinante; BnSP-6; BnSP-7; Proteínas fosfolipase A2-like; Cristalografia; Veneno de serpente; Veneno botrópico; Recombinant protein; Phospholipase A2-like proteins; Crystallography; Bothropic venom
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/192853

A toxicidade do veneno das serpentes do gênero Bothrops é resultante da ação integrada de várias toxinas, entre elas as fosfolipases A2 (PLA2s). Entre o grupo das PLA2s, há as PLA2s ativas enzimaticamente e as PLA2s desprovidas de atividade enzimática, denominadas proteínas PLA2-like. Apesar de sua inatividade enzimática, as proteínas PLA2-like desses venenos possuem potente ação miotóxica local; efeito o qual o soro antiofídico não é capaz de neutralizar efetivamente. Tendo em vista as limitações da soroterapia, é necessário compreender como essas miotoxinas agem localmente. Uma abordagem eficaz é o estudo estrutural-funcional destas toxinas com potenciais inibidores ou ativadores. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo estudar a relação estrutura-função da BnSP-7 e sua isoforma BnSP-6, duas miotoxinas PLA2-like do veneno de Bothrops pauloensis, através de sua interação com ácidos graxos. Deste modo, essas proteínas foram obtidas a partir do veneno bruto de B. pauloensis por cromatografia líquida de troca iônica seguida por cromatografia em fase reversa. As frações obtidas foram analisadas por espectrometria de massa para a confirmação de ambas as identidades, no entando não foi possível identifica-las. Foi observado por técnica de espectroscopia de dicroísmo circular a preservação das estruturas secundárias dessas toxinas (enovelamento referente à PLA2). Foram obtidos cristais da amostra purificada após 21 dias de incubação a 283 K e por esses dados cristalográficos verificou-se que a amostra possuia a sequência da proteína BnSP-7. Além disso, no intuito de estudar as regiões de importância funcional destas toxinas foi procurada a obtenção da BnSP-7 por expressão heteróloga em sistema eucarioto (Pichia pastoris). Não foi possível induzir a levedura a produzir a proteína recombinante, porém há perspectivas quanto ao sucesso da expressão heteróloga. A expressão do modelo molecular da proteína BnSP-7 abrirá caminhos para atestar hipóteses prévias dos domínios estruturais que são responsáveis pela atividade dessas toxinas, assim como os mecanismos de inibição propostos.