Pimelodus maculatus: rastreamento de células germinativas primordiais e coleta de sêmen

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Evangelista, Mariana Machado
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Micromanipulação; Reprodução induzida; Banco genético
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/157288

Nos últimos anos, Pimelodus maculatus vem sendo utilizado como espécie modelo para o desenvolvimento de técnicas de biotecnologia em Siluriformes. Neste estudo foram abordados aspectos da micromanipulação de embriões e obtenção de espermatozoides de P. maculatus. Assim, o objetivo do artigo 1 foi identificar e rastrear a rota migratória das Células Germinativa Primordiais (PGCs) em P. maculatus. Inicialmente, foram testadas soluções para incubação de embriões decorionados, e a solução de Characin apresentou resultados satisfatórios. Para identificar as PGCs, os embriões decorionados foram microinjetados com mRNA 3'UTR GFP-nos1, e o desenvolvimento foi monitorado em estereomicroscópio de fluorescência. Inicialmente, as PGCs foram visualizadas no estágio 6-10 somitos na região medial do embrião. Posteriormente, as PGCs migraram gradativamente na direção anteroposterior e, no estágio 20-24 somitos, localizaram-se próximo à extremidade posterior da região de extensão do vitelo. Nas larvas recém-eclodidas, as PGCs foram encontradas nas cristas genitais. No artigo 2, foi estabelecida uma metodologia não letal para obtenção de espermatozoides de P. maculatus, e também descritos aspectos da morfologia dos espermatozoides e da histologia dos testículos. No experimento 1, avaliamos os parâmetros espermáticos de amostras obtidas de peixes submetidos a diferentes protocolos de indução: 1) Solução Fisiológica Salina (controle), 2) Extrato Bruto de Hipófise de Carpa (CCPE) 10 mg kg-1 e 3) CCPE 10 mg kg-1 + ocitocina 5 UI kg-1. O protocolo que apresentou melhores resultados foi a indução com CCPE 10 mg kg-1, e no experimento 2 foi comparado ao procedimento de indução hormonal seguido de maceração dos testículos. Neste experimento, não houve diferença entre esses procedimentos quanto aos parâmetros avaliados, o que indicou que a indução com 10 mg kg-1 de CCPE pode ser satisfatoriamente utilizada para a obtenção do sêmen de P. maculatus sem a necessidade de sacrificar os machos para remoção dos testículos. Com relação à morfologia, P. maculatus exibiu espermatozóides do tipo aquasperms, com características típicas de espécies com fertilização externa. A análise histológica dos testículos revelou diferenças entre as regiões anterior e posterior, onde a primeira mostrou atividade espermatogênica, enquanto a segunda apresentou atividade secretora.