Efeito dos meios básicos de cultivo, IGF-1 e GH, no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais bovinos inclusos em tecido ovariano

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Jimenez, Carolina Rodriguez
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Genética e Melhoramento de Animais Domésticos; Nutrição e Alimentação Animal; Pastagens e Forragicul; Doutorado em Zootecnia; UFV
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Bovinos; Folículo pré-antral; Foliculogênese; Ovário in situ.; Biotechnology; Cattle; Pre-antral follicle; Folliculogenesis; Ovary situ; CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL::FISIOPATOLOGIA DA REPRODUCAO ANIMAL
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/1877

Os objetivos deste estudo foram (1) determinar o melhor meio-base para o cultivo de folículos pré-antrais bovinos inclusos no tecido cortical ovariano (in situ), utilizando o meio essencial mínimo (α-MEM), meio de cultivo de tecido 199 (TCM-199) e meio McCoy s (McCoy s); (2) avaliar diferentes concentrações do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (IGF-1) e do hormônio do crescimento (GH) no desenvolvimento dos folículos pré-antrais bovinos cultivados in situ; e (3) avaliar um meio sequencial contendo GH e, ou, IGF-1 sobre o cultivo in situ de longa duração de folículos pré-antrais bovinos. Ovários de vacas sem padrão racial definido foram coletados em abatedouros locais e transportados ao laboratório em TCM-199 suplementado com HEPES, bicarbonato de sódio, ácido pirúvico, penicilina e estreptomicina. No laboratório o córtex ovariano foi fragmentado e destinado a cultivos de curta duração (sete dias) nas fases I, II e de longa duração (14 dias) na fase III. O cultivo foi realizado em incubadora a 37 oC e 5% de CO2 em placa de 24 poços com troca total de meio a cada dois dias. Fragmentos ovarianos não cultivados (controle) e cultivados foram processados para avaliação histológica (morfológica e morfométrica), sendo avaliados o percentual de folículos morfologicamente normais, primordiais e em desenvolvimento (primários e secundários) além do diâmetro folicular e oocitário. Além disto, a viabilidade foi avaliada pela coloração de azul de tripan, sendo os folículos classificados como corados e não corados, mortos e vivos, respectivamente. As variáveis morfológicas e morfométricas foram submetidas à ANOVA, seguidas de comparações entre médias pelo teste de Tukey e Dunnett e as variáveis de viabilidade foram submetidas ao teste de Qui-quadrado (χ2). Os resultados da Fase I mostraram que o α-MEM suplementado (α-MEM+) preservou a morfologia folicular e se destacou na análise morfométrica e de viabilidade. Consolidando os resultados obtidos na fase I, na fase II utilizou-se o α-MEM+ com diferentes concentrações de IGF-1 recombinante humano (0, 30, 70, 100 ng/mL) ou GH recombinante humano (0, 10, 25, 50 ng/mL), compondo os experimentos 1 e 2, respectivamente. Os resultados mostraram que os tratamentos IGF-1(30 ng/mL) e GH (50 ng/mL) foram as concentrações mais eficientes para manter a funcionalidade morfológica e morfométrica, assim como, a viabilidade de folículos pré-antrais bovinos cultivados in situ. Na fase III, os fragmentos ovarianos foram cultivados em α-MEM+ na ausência ou presença de GH (50 ng/mL) e, ou, IGF-1 (30 ng/mL), adicionados da seguinte forma: (α-MEM+) durante 14 dias; (GH→IGF-1) GH do dia 1o ao 7o e IGF-1 do dia 8o ao 14o; (IGF-1→GH) IGF-1 do dia 1o ao 7o, e GH do dia 8o ao 14o; e (GH+IGF-1) durante 14 dias. O tratamento (GH→IGF-1) manteve o percentual de folículos morfologicamente normais durante todo o período de cultivo, e o percentual de folículos em desenvolvimento aumentou quando comparado com o controle a fresco após sete dias de cultivo, enquanto o diâmetro folicular aumentou em ambos, dia 7 e 14 de cultivo. Portanto, conclui-se que folículos pré-antrais bovinos cultivados in situ em meio sequencial, tratados com GH→IGF-1, melhoram o desenvolvimento e o diâmetro folicular até a primeira metade do cultivo e mantêm estes parâmetros com normalidade e viabilidade até o fim do cultivo in vitro.